仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞矿化结节及BMP-2表达影响的实验研究(1)
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摘要 目的:观察仙鹿健骨汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞矿化功能及骨形成蛋白(BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wister雌性大鼠48只,随机分为6组,每组8只,分为仙鹿健骨汤低、中、高剂量组(A、B、C组),α-D3对照组(D组)、模型组(E组)及空白对照组(F组),制备含药血清备用。成骨细胞建立采用新生SD乳鼠5只(24h内颅盖骨)进行体外细胞传代培养,分别采用茜素红染色、免疫组化染色法观察体外培养成骨细胞矿化结节变化及成骨细胞BMP-2表达。结果:B、C组及D组对成骨细胞矿化结节形成的作用均优于E组,并接近于F组水平,但组间比较无明显差异,通过免疫组化染色发现各组均有BMP-2的棕黄色深染,但B、C组阳性细胞比例明显高于其他各组,与E组比较有显著差异。结论:仙鹿健骨汤含药血清能明显增加成骨细胞矿化结节形成数,促进矿化功能,并且提高成骨细胞BMP-2表达水平,这可能是该方防治骨质疏松症的机理之一。
关键词 骨质疏松症 成骨细胞 碱性磷酸酶 实验研究 仙鹿健骨汤 大鼠
仙鹿健骨汤具有温补肾阳、健脾活血的功效,治疗骨质疏松有良效。本实验利用血清药理学和细胞培养相结合的方法,着重探讨仙鹿健骨汤含药血清对体外培养成骨细胞的矿化功能及对BMP-2表达的影响,从细胞学角度观察探讨此方治疗骨质疏松症的作用机理。
1 材料与方法
1.1 实验动物:12周龄的雌性Wistar大鼠48只,体重为200±20g,新生大鼠5只,由浙江中医药大学实验动物中心提供。
1.2 实验药品:仙鹿健骨汤组成:仙灵脾、鹿角胶、骨碎补、仙茅、黄芪、白术、仙鹤草、当归。由温州医学院附属第一医院中药房提供,水煎浓缩后分别含生药0.5g/ml、1g/ml、2g/ml。α-D3:以色列梯瓦制药工业有限公司生产,批号(95)卫药准字J-10号,水溶液浓度为0.005μg/ml。氯氨酮:上海第一生化药业有限公司生产,批号国药准字H31021897。
1.3 实验方法:①去势大鼠造模:取40只大鼠,腹腔注射戍巴比妥钠(3μg/100g)麻醉,去除双侧卵巢,逐层缝合,随机分成仙鹿健骨汤低、中、高剂量组(A、B、C组)、α-D3对照组(D组)、模型组(E组)5组,每组8只;另8只为空白组(F组) ......
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