张智慧 陈芝芸 叶蕾 严茂祥

    浙江中医药大学第一临床医学院 浙江 杭州 310006

    有研究证实，心、肾、肺等组织的局部肾素-血管紧张素系统(RAS)与该组织的纤维化密切相关[1-2]，其主要活性物质血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)主要通过1型受体(AT1)发挥作用。近年研究发现，肝脏组织中也存在着独立的RAS，而且在肝纤维化时异常激活，肝内AngⅡ与纤维化程度呈正相关[3-4]。笔者前期研究发现，从银杏科植物银杏的叶中分离纯化的银杏叶提取物(GbE)具有抗肝细胞损伤、抑制肝星状细胞的激活和转化，降低转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达，下调肝组织中能促进肝细胞凋亡的P21蛋白表达，减少胶原合成和沉积等作用，有效防止CCl4诱导大鼠肝纤维化的进展[5-6]。本研究旨在探讨GbE对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏AngⅡ及其受体表达的影响，进一步阐述GbE抗肝纤维化的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物：SPF级雄性SD大鼠48只，体重190-210g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心SPF屏障系统中。

    1.2 主要药物与试剂：GbE由西安中鑫生物技术有限公司提供，含24.03%的黄酮苷和6.15%的银杏内酯。CCl4为上海凌峰化学试剂有限公司产品。羟脯氨酸(Hyp)测试盒南京建成生物工程研究所；AngⅡ放免试剂盒为解放军总医院科技开发中心放免研究所产品；血管紧张素酶(ACE)ELISA试剂盒为美国ADL公司产品；Trizol为美国Invitrogen公司产品；反转录试剂盒和Perfect Real Time-SYBR Premix EX TaqTM试剂盒为宝生物工程(大连)有限公司产品；引物由上海英俊生物技术有限公司合成：AngⅡ上游引物：5'-AGC ACG GAC AGC ACC CTA TT-3'，下游引物：5'-AGA ACT CAT GGA GCC CAG TCA-3'，扩增片段：91bp；AT1上游引物：5'-TAT CAC AGT GTG CGC GTT TCA-3'，下游引物：5'-TGG TAA GGC CCA GCC CTA T-3'，扩增片段：68bp；β-actin上游引物：5’-TGT TGC CCT AGA CTT CTT CGA GCA-3’，下游引物：5’-CCA TAC CCA GGA AGG AAG GCT-3’；扩增片段：112bp；BCA试剂盒、鼠抗α-Tubulin为碧云天生物技术研究所产品 ......