姚 兰 王春雷

    1浙江中医药大学 浙江 杭州310053 2浙江省肿瘤医院 浙江 杭州310022

    附子为毛茛科植物乌头的侧根，味辛，温，有大毒，归肾、脾经，始见于《神农本草经》。附子乃“回阳救逆第一品”，有补火助阳，散寒止痛之功，主治阴盛格阳，大汗亡阳，风寒湿痹，临床上常用于亡阳虚脱、肢冷脉微等。现代药理研究发现，附子具有强心、抗心律失常、抗血栓、抗肿瘤、免疫抑制等多方药理作用。附子化学成分复杂，主要分为生物碱类、多糖、脂质类等，其活性成分兼毒性成分为乌头碱、次乌头碱与新乌头碱。因而，限制了附子在临床上的应用。为了降低或消除附子毒性，前人采用各种炮制工艺，得到了多种加工品。黑顺片即为制附子中的一种，它保留了附子大部分药用成分，但药性温和。因此本实验选用黑顺片进行研究，探讨黑顺片对于骨性关节炎(OA)的治疗效果。

    1 材料

    1.1 实验动物：SD 大鼠40只，雌性，体重200±20g，购自上海斯莱克实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016。大鼠饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心内，适应性饲养1周后开展实验。整个实验过程均在该实验中心SPF级屏障环境中完成。

    1.2 试剂及仪器：IMDM 培养基(HyClone)、FBS 胎牛血清(Cellmax)、PBS 磷酸盐缓冲液(HyClone)、青链霉素混合液(Gibco)、碘乙酸(SIGMA-ALDRICH)、二型胶原酶(worthingyton)、EDTA 脱 钙 液(Solarbio)、TaKaRa Prime ScriptTM RT reagent Kit，YLS-3E 电子压痛仪(安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司)、足底热辐射测痛仪(37370，意大利UGO BASILE)、MDF-J281AT 超低温冰箱(SANYO)，DK-S12型恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司)、SW-CJ-1F 层流超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)、AXiovert200荧光倒置显微镜(Olympus ckx41)、全自动多功能酶标仪(BioTek)、CO2细胞培养箱(Thermo)。

    2 方法

    2.1 黑顺片水提物制备：取黑顺片(四川江油中坝附子科技发展有限公司 ......