张旼旼 黄新宇 戴 慧

    杭州市肿瘤医院 浙江 杭州 310002

    晚期肝癌患者常伴有体力、免疫功能、营养状况低下等状况[1]，往往不能耐受放疗、化疗等积极治疗措施。寻求能够抑制肿瘤生长，抑制肝癌细胞增殖，且患者更易耐受的治疗方法成为治疗所需。益气活血软坚解毒方(YHRJ)是由生黄芪、炒白术、藤梨根、白花蛇舌草、田三七、半枝莲、水红花子等中药组成的复方制剂，前期研究中已发现，该方剂在肝癌的治疗中有增效减毒的作用。本文中，我们将探讨YHRJ在抑制肝癌细胞生长和增殖作用中的分子作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物与瘤株：动物：BALB/c小鼠，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物许可证号SCXK(沪)2013-0016。饲养条件：恒温22±2℃，湿度50%～60%，光照每12小时明暗交替，换风次数15～20次/小时。由浙江中医药大学动物实验研究中心饲养，实验饲养室许可证号SYXK(浙)2013-0184。瘤株：H-22肝癌细胞瘤株，购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

    1.2 药物与试剂：药物：益气活血软坚解毒方(YHRJ)组成：生黄芪、藤梨根、白花蛇舌草、半枝莲各30g，炒白术15g，田三七、水红花子各8g，凌霄花9g，炮山甲10g。常规水提取，配成等效剂量YHRJ 3.4g/ml、高剂量YHRJ 6.8g/ml，4℃保存备用。奥沙利铂(OXA)：江苏恒瑞医药股份有限公司产品，用5%葡萄糖液调配成1g/L的溶液，遮光保存。试剂：苏木素染液为servicebio产品，伊红染液购于珠海贝索生物技术有限公司，增殖细胞核抗原(PCNA)抗体为Affinity产品，免疫组化试剂盒产自MDL，逆转录试剂盒、PCR试剂盒均为康为世纪公司产品。

    1.3 动物模型制备：取48只小鼠，收集对数生长期H-22肝癌细胞，调整细胞浓度为1×107个/ml，于颈部右侧皮下接种0.2ml，继续饲养2周，待肿瘤增殖至可以触及时，将动物随机分为6组：A组：对照(NS)组；B组：OXA组(1.5mg/kg)；C组：等效剂量YHRJ组(3.4g/ml生药 ......