姜春燕 宋 红 孔丽娅 郑小伟

    浙江中医药大学基础医学院 浙江 杭州 310053

    支气管哮喘以炎性细胞浸润、气道高反应性以及气道重塑[1]为主要特征，由于该疾病患病率、复发率和经济影响日益增加，已成为全球关注的一个原因。全球疾病负担研究估计全球有3.39亿哮喘患者[2]。目前，哮喘的发病机理仍未全部阐明。从免疫学角度分析，哮喘是由各种介导和相互作用的免疫细胞及相应细胞因子引起[3]。相关研究表明，Th1/Th2免疫失衡、Treg/Th17免疫失衡在哮喘的发病进程中发挥重要作用[4-5]。本研究在卵清蛋白致敏法与多因素复合法结合建立肾气虚哮喘模型基础上，通过磷酸化抗体芯片技术，筛选出肾气虚哮喘发病机制FOXO信号通路的相关蛋白，探讨益肾喘宁汤可能的作用靶点，为临床提供可靠的动物实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：SPF级雄性Wistar大鼠32只，鼠龄6～8周，重量220～250g，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，在浙江中医药大学动物实验中心按《中华人民共和国实验动物管理条例》进行喂养。

    1.2 主要试剂与药物：OVA卵清蛋白(OVA，gradeV，sigma有限公司，批号：SLBQ9036V)；Al(OH)3粉末(上海凌峰化学试剂有限公司，批号：20130818)；3%戊巴比妥钠(浙江中医药大学动物实验研究中心)；大鼠血清睾酮(T)、甲状腺素(T4)ELISA试剂盒(南京建成生物工程研究所)；大鼠血清皮质醇(COR)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)；益肾喘宁汤由熟地黄、怀山药、山茱萸、泽泻、丹皮、茯苓、苦参、天浆壳各12g，旋覆花、黛蛤散、生黄芪各15g，北五味子5g，沉香8g组成，中药饮片均从浙江中医药大学中医门诊部购买，用自动煎药机制备成含生药量1.6g/ml的药液，存放于4℃冰箱保存，备用；普米克令舒(布地奈德悬浮液)(浙江大学附属第二医院，批号：LOT 322335)。

    1.3 主要仪器：超声雾化吸入器(江苏鱼跃医疗设备股份有限公司)；离心机(Pico21 ......