王昱霁 朱婉萍

    1 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

    2 浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007

    本研究利用微波辅助法，提取南方红豆杉枝叶中的黄酮类化合物，在单因素试验的基础上采用响应面法优化提取工艺，以期获得较高的提取得率。为后续研究南方红豆杉中的黄酮类化合物或其他有效成分，为提高南方红豆杉资源的综合利用率提供实验基础和参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器：南方红豆杉枝叶(宁波泰康红豆杉生物工程有限公司提供)，清洗晒干粉碎并过50目筛；芦丁对照品(中国食品药品检定研究院)；无水乙醇、亚硝酸钠、氢氧化钠等试剂，均为分析纯级。MAS-II PLUS微波萃取工作站(宁波新芝生物科技股份有限公司)；UV1800型可见紫外分光光度计(岛津)；MS204分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]。

    1.2 芦丁标准曲线的绘制：采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[1]绘制标准曲线。称取在105℃下干燥至质量恒定的10mg芦丁标准品，置于25ml容量瓶中，用65%乙醇溶液溶解并定容，配制成浓度为0.4mg/ml的芦丁标准溶液。准确移取芦丁标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加65%乙醇至5ml，依次加入 5%NaNO2溶液 0.3ml，摇匀，放置 6min；加 10%Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀，放置6min；加入4%NaOH溶液4ml，摇匀，放置15min，再定容至10ml。以不加芦丁对照品溶液同法操作得到的溶液作为空白对照，全波段扫描，找到吸收度最大波长，在最大波长处测定吸收度。

    1.3 南方红豆杉总黄酮的提取和吸光度测定：称取粉碎并过50目筛的南方红豆杉粉末5g，装入四颈瓶，加入不同浓度的乙醇溶液为溶剂，在不同提取条件下，利用微波萃取工作站进行微波辅助提取，提取后离心(2500 r/min，10min)，取上清，补足加入溶剂的量后，得到南方红豆杉总黄酮待测液。将提取所得的每份样液，分别取0.5ml，按“1.2”方法测定吸光度，根据标准曲线和加入的提取溶剂体积计算南方红豆杉总黄酮提取得率 ......