周琦浩 宁方颖 李双双

    1 浙江省人民医院望江山院区 浙江 杭州 310024

    2 浙江省人民医院 浙江 杭州 310014

    3 浙江省肿瘤分子诊断与个体化治疗重点实验室 浙江 杭州 310014

    本研究选取单纯的益气养阴中药(黄芪、太子参、女贞子、旱莲草、麦冬)，制备大鼠含药血清，联合化疗药(阿糖胞苷、喜树碱、紫杉醇)，共同作用于人白血病细胞系KG1α细胞，观察细胞的增殖抑制率、凋亡、细胞周期等。探讨益气养阴方联合化疗药对KG1α细胞活性的影响和机制。

    1 实验材料

    1.1 动物和细胞株：采用8周龄、清洁级雄性Wistar大鼠36只，体重200g±20g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。KG1α细胞株购于BNCC细胞库。

    1.2 药物及试剂：中药材由杭州华东医药有限公司提供。喜树碱、阿糖胞苷、紫杉醇：Aladdin公司。GAPDH抗体：CST公司；CD44、P21、survivin、SDF-1：abcam公司。

    2 实验方法

    2.1 药物制备及剂量：益气养阴方：黄芪、太子参各30g，女贞子21g，旱莲草18g，麦冬15g。药液煎煮按照常规水提法进行：即煎煮前先用凉水浸泡30min，煎煮2次。浓缩至1.14g/ml，冷却分装，4℃备用。根据“动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表”来计算大鼠灌胃中药的剂量。对照组给予等量生理盐水。

    2.2 含药血清的制备：将大鼠随机分为空白对照组和含药血清组，分2次给灌胃(9∶00am、3∶00pm)，灌胃7天。末次给药2h后，大鼠称重，按3.8ml/kg的量用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，取血前应探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左缘正中，选心跳最明显的部位作穿刺。灭活。-20℃冷冻保存备用，2个月内用完。若是4℃保存，1周内用完。

    2.3 细胞培养：KG1α细胞的培养条件：含10%FBS的IMDM培养基，37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养。

    2.4 CCK8检测细胞活力：取正常培养的处于对数期的细胞铺96孔板 ......