何 飞 汝触会 郑 琦 季也民 徐俭朴 蔡宛如

    1 浙江省中西医结合医院 浙江 杭州 310003

    2 天台县人民医院 浙江 天台 317200

    3 浙江中医药大学附属第二医院 浙江 杭州 310005

    支气管哮喘是一种具有异质性慢性气道炎症性疾病，发病人数众多，传统中医药在支气管哮喘防治方面具有较好效果[1]，芍药甘草汤作为著名经方之一，目前已广泛应用于临床，我们前期研究发现其能调节哮喘大鼠Treg/Th17细胞失衡的作用[2]。本项目运用血清药理学方法，利用体外实验观察芍药甘草汤含药血清对哮喘大鼠T淋巴细胞凋亡及淋巴细胞p-Akt水平的干预作用，以研究该经方防治支气管哮喘的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：SPF级雄性SD大鼠，体质量250±20g。由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供[动物生产许可证号SCXK(沪)2013-0016]。饲养条件：恒温，温度22±2℃，湿度50%～60%，光照每12小时明暗交替，换风次数15～20次/小时。由浙江中医药大学动物实验研究中心饲养[实验饲养室许可证号SYXK(浙)2013-0184]。实验动物的处置严格按照浙江中医药大学动物实验中心的伦理相关规定进行。

    1.2 试剂及仪器：芍药甘草汤由浙江省中西医结合医院制剂室制成流浸膏(芍药和甘草的比例1∶1),生药含量1g/ml；卵白蛋白(Sigma公司，货号：SLBB5992V)；氢氧化铝(Thermo公司，货号：77161)；P-AKT抗体(Affinity公司，货号：AF0908)；PI3K抑制剂 LY294002(sigma公司，货号：19-142)；CO2培养箱(SANYO公司，XD-101)；流式细胞仪(Becton-Dickinson公司，FACS Calibur)；酶标仪(BioTek公司，ELx800)；核酸电泳仪(北京六一公司，DYY-6B)。

    1.3 实验方法：分述如下。

    1.3.1 哮喘大鼠模型建立：SD大鼠(雄性)20只，使用腹腔注射卵白蛋白(OVA)致敏并雾化诱发建立大鼠哮喘模型，在第1天、第8天分别腹腔注射造模液1ml(含氢氧化铝100mg、卵白蛋白100mg)致敏。从第15天开始 ......