益气养阴解毒方对胃癌前病变大鼠Th17/Treg平衡的影响
乳鼠,灌服,试剂盒,1材料,2方法,3结果,4讨论
汤小芳 杨晴柔 陈芝芸 何蓓晖 严茂祥#1 桐乡市第一人民医院 浙江 嘉兴 314505
2 浙江中医药大学附属第一医院 浙江 杭州 310006
胃的癌前病变(PLGC)是正常胃黏膜发展到胃癌的重要阶段,积极干预胃癌前病变是降低胃癌发生率的有效措施。近年研究发现,胃癌的发生发展与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡失调而引起肿瘤细胞发生免疫逃逸相关[1]。笔者在临床上采用益气健脾、滋肝补肾、清热解毒为治疗原则的“益气养阴解毒方”治疗慢性萎缩性胃炎伴肠化/异型增生取得较好疗效[2-3]。为进一步探讨其作用机制,本研究采用新生大鼠短期灌服致癌剂诱导胃癌前病变模型,并以Th17/Treg平衡为切入点,阐述益气养阴解毒方防治胃癌前病变的免疫调节机理。
1 材料
1.1 动物:4~5周龄Sprague Dawley(SD)大鼠,雌性10只,雄性5只,SPF级,购自上海斯莱克实验动物有限公司【SCXK(沪)2012-0002】;在浙江中医药大学动物实验研究中心屏障环境中适应性喂养至2+月龄,以雌雄比2∶1进行配种,自由饮水采食,雌性大鼠怀孕后单笼喂养,选取出生3日的雄性乳鼠进行造模实验。
1.2 药物与试剂:益气养阴解毒方由黄芪、党参、熟地、山药、山茱萸、茯苓、泽泻、丹皮、白花蛇舌草、仙鹤草、莪术组成,按 2∶1.5∶2∶1.5∶1.5∶1.5∶1.5∶2.5∶2.5∶2.5∶1比例,由浙江中医药大学附属第一医院制剂室制成流浸膏,每毫升含生药2.565g。1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)由东京化成工业株式会社提供;Bio-Plex EXP Rat Cyto Group Kit、Bio-Plex ProTMRat IL17A、IL-6、IL10 Standard、Bio-Plex ProTMRat TGF-β1 Standard由美国Bio-Red公司提供;总RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒为宝生物工程(大连)有限公司提供;CHamQTM SYBRR qPCR Master Mix由南京诺唯赞生物科技有限公司提供;总蛋白提取试剂盒、BCA定量试剂盒由江苏凯基生物技术股份有限公司提供 ......
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