张庆乾 叶 菁 陈 淼 陈嘉斌 徐国暑 谢鑫灵 余志红

    浙江省立同德医院 浙江 杭州 310012

    清热消积方基于肿瘤患者“正气虚损、阴阳失衡、脏腑功能失调，痰、瘀、热、毒互结”的病机而组方。已有研究证实该复方具有较好的抗肿瘤效果，但其是否通过调控免疫功能进而发挥抗肿瘤作用尚不清楚。本研究采用荷瘤Lewis肺癌小鼠移植瘤作为研究对象，观察其对肿瘤组织PD-1/PD-L1 蛋白及相关细胞因子的影响，对其抗肿瘤机理进一步探讨。

    1 材料与方法

    1.1 材料：分述如下。

    1.1.1 动物模型：Lewis肺癌细胞株购于中国科学院典型培养物保藏中心(中国科学院上海生命科学院细胞库)。1.1.2 实验用药：清热消积方中药材蛇六谷、白花蛇舌草、半枝莲、绞股蓝等由浙江省立同德医院药房提供。以上药材采用粉碎机进行粉碎，过200 目药筛后于3～5L圆底烧瓶中，加水混匀后置于中药陶瓷罐中加热提取2h，过滤收集全部滤液。残渣重复提取，合并两次滤液，于旋转蒸发仪中减压浓缩。最后将全部中药提取后浓缩提取液，并于冷冻干燥机中低温减压干燥，备用。

    1.1.3 主要试剂及仪器：小鼠血清γ 干扰素(IFN-γ)试剂盒、白介素-2(IL-2)试剂盒以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒购自南京建成生物工程研究所；DMEM细胞培养基、胎牛血清、双抗、胰蛋白酶消化液均购自兰堡生物技术服务部；小鼠脱毛剂(LANUOR 兰诺儿)购于杭州宏莱生物科技有限公司 ......