沈惠琳 李为民# 胡成琛 钱 瑾 吴建良 李国栋

    1 杭州师范大学附属医院 浙江 杭州 310015

    2 杭州市丁桥医院 浙江 杭州 310016

    丹皮酚是一种从牡丹皮中分离出来的天然酚类化合物，具有多种临床药理功效，包括抗炎、镇静、抗肿瘤等作用[1，2]。近年来研究发现，丹皮酚可在乳腺癌、胃癌和大肠癌中发挥抗癌作用[1,3，4]。丹皮酚还可加强表阿霉素的化疗疗效，减轻心脏毒性[5]。但罕有丹皮酚作用胰腺癌及其分子机制的研究。内质网应激(ERS)作为机体应对外界刺激的应激反应，同时参与肿瘤发生发展，其中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)起到调控细胞增殖及代谢能力的作用[6]。GRP78可通过肌醇酶-1(IRE1)/肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)信号通路促使凋亡蛋白Caspase-12表达增加，诱导细胞凋亡发生[7]。本研究旨在探讨丹皮酚对胰腺癌细胞的抗癌作用，观察丹皮酚对内质网应激GRP78/TRAF2信号通路影响，研究其抗癌作用机制。

    1 材料与仪器

    1.1 细胞株与主要试剂：人胰腺癌细胞PANC-1细胞株购自中国科学院细胞库上海细胞生物学研究所；丹皮酚(批号19051503，纯度>98%)，购自上海普锐生物科技有限公司；二甲亚砜(DMSO，批号MFCD00002089)和内质网应激抑制剂四苯基乙酸(4-PBA，批号MFCD00800247)均购自美国Sigma公司；胎牛血清(批号SA311.02)购自兰州民海生物工程有限公司；高糖DMEM培养基(批号11995065)购自美国Gibco公司；青霉素-链霉素溶液(批号C0222)、BCA试剂盒(批号P0010)和增强型CCK-8试剂盒(批号C0042)购自上海碧云天生物技术有限公司；Annexin V-FITC/PI试剂盒(批号70-APCC101-100)购自杭州联科生物技术股份有限公司；GRP78抗体(批号ER40402)、TRAF2抗体(批号ET1612-5)、Bax抗体(批号EM1203)、内参 GAPDH(批号EM1101)和HRP 标记的IgG抗体(批号HA1001)均购自浙江杭州华安生物有限公司；Cleaved Caspase-12抗体(批号 35965)和Cleaved Caspase-3抗体(批号9664)均购自美国CST公司 ......