崔佳斌 郑栋栋 陈 奇 江岸林

    海盐县中医院 浙江 海盐 314300

    非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除酒精和其他明确的肝损害因素所致的，因大量脂质在肝脏沉积，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征，NAFLD可进一步演变为非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至肝癌[1]，已逐渐成为最主要的肝脏疾病之一。二陈汤出自《太平惠民和剂局方》，由半夏、橘红、白茯苓、甘草、乌梅和生姜组成，具有燥湿化痰、理气和中之功效，广泛用于NAFLD的治疗[2]。近年来发现，法尼酯衍生物X受体(FXR)在物质代谢及肠道稳态中发挥重要的作用，通过调节胆汁酸(BA)、脂类及糖等代谢，可调控NAFLD的发展和转归[3]。本课题就二陈汤是否通过调控FXR信号通路干预NAFLD进行研究。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：SPF级雄性SD大鼠51只，4周龄，体重(100±10)g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物许可证号：SCXK(沪)2012-0002，饲养于浙江中医药大学实验动物中心。适应性喂养1周后随机分成2组：对照组8只，造模组43只，对照组予常规饲养，造模组予高脂饲料喂养，高脂饲料配方：基础饲料72.6%，猪油10%，胆固醇2%，胆盐0.4%，蛋黄粉5%，蔗糖10%。造模组于造模第8、10和12周各处死1只大鼠，取肝脏组织做HE染色，判定造模情况。

    1.2 药物及试剂：奥贝胆酸(美国Sigma)，二陈汤(法半夏、茯苓各9g，陈皮、乌梅、生姜各6g，炙甘草3g，由海盐县中医院中药房提供)；RNA纯化试剂盒(北京天根生化)，PCR试剂盒(上海士锋生物)，蛋白提取试剂盒(杭州联科)，FXR、小异二聚体伴侣(SHP)、胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)和胆盐输出泵(BSEP)一抗(英国Abcom)，二抗(北京中杉金桥)，BA检测试剂盒(上海武昊)，引物(生工生物工程)。引物序列：FXR(5’-CCATTTACAAGCCACGGACG-3’、5’-CCCAGGTTGGAATAATAGGACG-3’) ......