高莺 李继华 李玉宝 左奕 胡静 马永清 王雪梅

    (1.口腔疾病研究国家重点实验室，四川大学，四川 成都 610041；2.山西医科大学第一医院 口腔科,山西 太原 030001；3.四川大学 纳米生物材料中心，四川 成都 610041)

    组织工程化骨由种子细胞、生物支架材料2大元素构建而成，其发展克服了自体或同种异体骨移植等传统骨缺损修复方法取材有限、并发症多的弊端，为修复大面积骨缺损提供了全新思路，成为骨缺损治疗新的突破点。种子细胞要求具有来源广泛、易于接种存活、稳定性好等特点，更为重要的是细胞在特定环境下能够实现快速扩增，并具有较强的成骨向分化能力[1-2]。而生物支架材料则不仅要起到支撑作用，维持原有组织外形，还需起到三维模板作用，为最初的细胞黏附、增殖和分化提供场所，并为随后的受损组织再生提供引导[3-4]。本研究通过大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)与新型多孔纳米羟磷灰石/聚酰胺6(nano-hydroxyapatite/polyamide 6，n-HA/PA6)复合体外培养，观察支架材料对BMSCs增殖和骨向分化的影响；并运用此细胞—支架复合体修复SD大鼠颅骨极限缺损，以探讨BMSCs作为种子细胞、n-HA/PA6多孔复合体作为生物支架材料构建组织工程化骨的骨缺损修复效果。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物、主要试剂

    健康成年SD大鼠，体重280～350 g,雌雄不限，由四川大学华西医学中心实验动物部提供。LGDMEM培养基购自美国Gibco公司，胎牛血清购自美国Hyclone公司，地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、维生素D3均购自美国Sigma公司。

    1.2 大鼠骨髓BMSCs的体外分离、培养

    将SD大鼠处死，无菌条件下取其股骨、胫骨，剪去骨骺端，用注射器冲出骨髓，与含10%FBS的LG-DMEM培养基制成细胞悬液，在37℃、5%CO2的培养箱内贴壁培养，每2～3 d换液。当细胞70%～80%融合时，用0.25%胰酶消化，1∶2比例传代。从第3代BMSCs开始，置于骨向诱导液中培养：含10%FBS的LG-DMEM、10 nmol·L-1地塞米松、10 mmol·L-1β-甘油磷酸钠、0.05 mmol·L-1左旋抗坏血酸。培养过程中，每天在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况、形态变化，并照相记录。

    1.3 n-HA/PA6多孔支架材料的制备 ......