关键 程宗生 王健平 李德超 邓慧鑫

    (佳木斯大学口腔医院 口腔颌面外科，黑龙江 佳木斯 154004)

    从Codivilla介绍牵张成骨术(distraction osteogenesis，DO)至今已有一百多年的历史，但目前对牵引产生的机械力如何转化为生物学信号的细胞和分子机制尚不清楚。骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)参与DO中新骨的生成并发挥重要作用[1-3]，其可能参与DO力学信号向生物信号转化过程[4-5]。BMP信号转导通路在成骨细胞对机械力刺激响应中的作用还不清楚，对该问题的研究将为DO外源性应用BMP提供理论基础。本研究旨在通过生理状态和阻断BMP信号转导通路时，在mRNA层面对比研究成骨细胞株MC3T3-E1中Runx2对机械离心力刺激的响应，从侧面探讨BMP信号转导通路在成骨细胞对机械力刺激响应中的作用和意义。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    小鼠胚成骨细胞株MC3T3-E1(中国医学科学院基础所细胞中心)，DMEM(GIBCO公司，美国)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，重组小鼠Noggin蛋白(Perpro Tech公司，美国)，Trizol(上海生工公司)，cDNA逆转录试剂盒、Power SYBRRGreen PCR试剂盒、ABI7300 PCR仪(ABI公司，美国)，50 bp DNA Marker(TaKaRa公司，日本)，细胞培养瓶/板(Coring公司，美国)。

    1.2 MC3T3-E1细胞的培养

    37℃、5%CO2、含10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的DMEM培养基中培养MC3T3-E1细胞，隔天换液。当细胞铺满瓶底80%以上时，37℃下0.25%胰蛋白酶1.5 mL消化3～5 min，见瓶底出现针孔样透明时，加入等量含10%FBS的DMEM培养基终止消化，吹打细胞制成细胞悬液，按1∶3传代，第2天换液。

    1.3 细胞加力

    自制六孔细胞培养板离心支架，使之能将匹配的六孔板一起固定于LXJ-Ⅱ型离心沉淀机中离心，离心加力系统的剖面见图1。根据公式：离心力(RCF)=1.118×10-5×R×V2计算离心力的大小，单位为重力加速度×g。离心半径R约19 cm，转速V约1 100 r·min-1，离心力约271×g。 ......