李一 文志宁 李龙江，3 李梦龙 张壮 高宁

    (1.口腔疾病研究国家重点实验室，四川大学，四川 成都 610041；2.四川大学化学学院 分析化学教研室，四川 成都 610064；3.四川大学华西口腔医院 头颈肿瘤外科，四川 成都 610041)

    口腔癌的发病率位居全身恶性肿瘤发病率的前10位，是威胁人类健康的主要疾病之一[1]。目前虽然出现了多种全新治疗方法，使患者治疗后的生存质量明显提高，但生存率却无明显改善[2]，术后转移和复发是患者死亡的主要原因。究其死亡根本原因在于早期诊断方法匮乏，错失了治疗的最佳时机。

    研究[3]表明，拉曼光谱技术对构成人体的基本生化物质非常灵敏，通过光谱分析可以获得大量有关生化成分含量、构型构象、组成及构成比的信息。拉曼光谱技术在恶性肿瘤的诊断和治疗等方面已得到跨越式发展。应用拉曼光谱技术检测消化系统、乳腺、女性生殖系统等癌变细胞内生化物质的变化发现，通过组织细胞光谱特征的检测可有效地在微观水平反映组织形态学的细微变化，为癌症的早期诊断提供强大的理论依据[4-7]。本研究采用近红外拉曼光谱技术及化学计量法，对口腔正常黏膜、白斑(oral leukoplakia，OLK)及口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)组织标本内组织及细胞生化物质的变化进行检测，应用径向基核函数支持向量机对不同病变进行分类建模，并验证其分类准确性和稳定性，以了解口腔黏膜细胞恶性转化过程中的光谱学变化规律，为应用拉曼光谱技术早期诊断口腔黏膜恶性病变奠定理论基础。

    1 材料和方法

    1.1 临床资料

    收集2006年1月—2007年12月在四川大学华西口腔医院颌面外科进行治疗的30例口腔黏膜白斑患者和20例口腔鳞状细胞癌患者的病理切片，所有病理切片均根据《世界卫生组织肿瘤病理学和遗传学》(2005年版)[8]诊断。同时收集10例人群的口腔正常黏膜组织，常规固定，石蜡包埋。

    对每一标本连续切片，厚度为5 μm，随机选取相邻2张并贴片。其中1张切片以苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色，邀请四川大学华西口腔医院经验丰富的2位病理学家及1位头颈肿瘤外科医生，将HE切片置于光学显微镜下进行会诊，精确定位黏膜白斑及鳞状细胞癌所在区域，并在切片上标示；另1张切片于定制的CaF2晶片上贴片，常温下风干后，以纯二甲苯脱蜡30 min，浸入95%乙醇内洗涤30 min，风干，对照HE切片，确定此切片的组织病理类型及相应病损区域 ......