黄红杰 平飞云 胡济安 赵士芳

    (1.杭州师范大学附属医院 口腔科，浙江 杭州 310015；2.浙江大学附属第二医院 口腔科，浙江 杭州 310008；3.浙江大学附属口腔医院 口腔病理科；4.口腔颌面外科，浙江 杭州 310006)

    Notch信号途径的主要受体为Notch1，其是否具有促癌或抑癌作用取决于肿瘤的组织来源和细胞类型[1-2]，在舌癌中的作用尚未明确。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)在舌癌等多种上皮性肿瘤中过表达，具有促癌作用[3-4]。近年来的研究[5-7]表明，Notch1和EGFR信号途径在许多肿瘤中存在交互作用，共同调控细胞增殖和分化。本课题组在以前的实验中检测了舌癌标本中Notch1和EGFR的表达，推测Notch1在舌癌中起抑癌作用并与EGFR可能存在交互作用。本实验将在人舌鳞癌Tca8113细胞中进一步探讨过表达外源性Notch1对细胞体外生长和EGFR表达的影响。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂

    PRMI1640培养基、TRIzol溶液(Gibco公司，美国)，脂质体LipofectamineTM2000(Invitrogen公司，美国)，甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)(Sigma公司，美国)，Taq DNA聚合酶、逆转录酶M-MLV(Promega公司，美国)，一抗Notch1(sc-6014)、EGFR(sc-03)、β-actin(sc-47778)(Santa Cruz公司，美国)，ECL试剂盒(Pierce公司，美国)，SP免疫细胞化学试剂盒(北京中杉公司)。

    1.2 细胞培养

    Tca8113细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所，用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基在含5%CO2的37°C恒温培养箱中常规传代培养。

    1.3 体外基因转染

    编码Notch1胞内域的真核表达质粒pRAMICIRES2-EGFP和对照质粒pIRES2-EGFP由第四军医大学基础医学院医学遗传和发育系张萍惠赠。采用LipofectamineTM2000进行体外基因转染，按产品说明书操作。实验分3组：目的质粒转染组、对照质粒转染组和未转染组。细胞培养于6孔板中，转染日细胞密度为80%～90%。以OPTI-MEMⅠ无血清培养基分别稀释质粒和脂质体，室温孵育5 min后，将上述2组分轻缓混合 ......