张风河 黄萍 杨丕山 张雪

    (1.山东大学口腔医院 口腔颌面外科；2.山东大学齐鲁医院 放疗科，山东 济南 250012)

    神经营养蛋白在神经发育和功能维持方面起着重要作用，其功能作用的信号传导主要是通过2种受体来完成，即酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase,Trk)受体(TrkA、TrkB、TrkC)和p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor，p75-NTR)。研究表明，单纯抑制p75NTR并不能提高脊髓的再生[1]，但在发育和周围性神经损伤中，p75NTR在雪旺氏细胞髓鞘化以及再髓鞘化中是必需的[2]。在周围神经的雪旺氏细胞中，神经损伤是p75NTR表达的有力刺激因素[3]，这提示p75NTR在周围神经再生调控中具有重要作用。然而，p75NTR在损伤的周围神经再生中是正向还是反向调控作用目前仍不清楚，本研究对p75NTR在p75NTR基因敲除小鼠面神经损伤后再生中的作用进行了研究。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物和分组

    选取由澳大利亚弗林德丝大学医学中心提供的实验动物90只，其中野生型129sv小鼠和p75NTR基因敲除小鼠各45只。年龄6～8周，体重25～29 g，健康，雌性，手术后在相同标准条件下喂养。2种小鼠用于霍乱毒素B(cholera toxin B，CTB)顺行标记和免疫组织化学检测各35只(其中各5只通过顺行标记方法观察再生轴突长度)，用于Fast Blue逆行标记各10只。

    1.2 实验仪器和试剂

    Olympus SZX-12解剖显微镜(Olympus公司，日本)，Leica冷冻切片机(Leica公司，德国)，微量注射器(Hamilton公司，美国)，CTB、Fast Blue、鼠生长相关肽43抗体(GAP43)(Sigma公司，美国)，羊CTB抗体(List Biologicals公司，美国)，兔抗-PGP9.5(1∶5 000)(Invitrogen公司，美国)，兔抗钙基因相关肽(rabbit anti-calcitonin gene related peptide，CGRP)(Merke公司，德国)。

    1.3 方法

    1.3.1 面神经损伤及位置记录 采用1 μL·g-1氯胺酮和0.5 μL·g-1illumxylazil腹腔注射麻醉90只小鼠，常规消毒铺巾，在右侧耳根部做1 cm弧形切口，沿着外耳道向下分离，显微镜下仔细分离结缔组织后解剖出面神经干 ......