人涎腺腺样囊性癌相关同源异型盒基因差异表达的研究
腺体,1材料和方法,1病例及样本采集,2总RNA的抽提,纯化及质检,3定制同源异型盒基因表达谱芯片,4芯片杂交,5逆转录成cDNA,6设计引物,7常规PCR扩增,荧光实时定量PCR检测TGIF,8数据处理和统计
夏辉 李龙江 韩波 潘剑 高宁(口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川 成都 610041)
人涎腺腺样囊性癌相关同源异型盒基因差异表达的研究
夏辉 李龙江 韩波 潘剑 高宁
(口腔疾病研究国家重点实验室,四川大学,四川 成都 610041)
目的 研究人涎腺腺样囊性癌及正常腺体中同源异型盒基因的表达差异,认识该基因与涎腺腺样囊性癌发生发展的关系。方法 设立6组严格配对的腺样囊性癌/癌旁腺体标本及2组腺样囊性癌细胞株/癌旁腺体标本,采用定制的含232条人类同源异型盒基因探针的Oligo芯片进行分析,归纳2组间差异基因信息。荧光实时定量PCR技术检测高度可疑的涎腺腺样囊性癌相关基因在不同样本中的mRNA表达水平,统计学分析找出明显异常表达的同源异型盒基因。结果 组织样本出现上调的同源异型盒基因67条,下调基因54条;细胞样本中出现上调的同源异型盒基因12条,下调基因15条;同时出现在组织及细胞样本中的上调基因1条(TGIF);下调基因7条,出现频数较高的为EVX1、PITX1。荧光实时定量PCR检测显示TGIF、EVX1在ACC-M与正常腺体组织的表达量有统计学差异。结论 同源异型盒基因作为细胞正常增殖和分化的关键基因,可能与涎腺腺样囊性癌形成过程密切相关。
腺样囊性癌; 同源异型盒基因; 基因芯片
同源异型盒基因作为细胞正常增殖和分化的关键基因,掌控着细胞的发展方向,与细胞恶性转化及恶性增殖密切相关。寻找和确定在涎腺腺样囊性癌发病中起作用的关键同源异型盒基因,将对涎腺腺样囊性癌发病机制的研究探索及其临床治疗提供一个新的契机。本研究通过定制表达谱芯片和荧光实时定量PCR技术,对人涎腺腺样囊性癌及正常腺体标本进行基因表达差异的定性和定量研究,探索差异表达的同源异型盒基因在涎腺腺样囊性癌发生、发展及去分化过程中的变化规律。
1 材料和方法
1.1 病例及样本采集
四川大学华西口腔医院头颈肿瘤病房涎腺腺样囊性癌住院患者6例,男性4例,女性2例,年龄32~71岁,平均年龄48.2岁。其中3例位于右颌下腺,2例位于左腭,1例位于左舌下腺。依UICC(2002年)[1]TNM分期,T2期2例,T3期3例,T4期1例。所有患者均经活检确诊,且术前未接受任何治疗。原发灶切除后,于病灶中心区切取5mm×5mm×5mm组织块,剔去多余组织;同时于病灶外2 cm处切取同样大小的正常腺体组织。DEPC液清洗血迹,无菌纱布轻拭水迹。将各标本均分为二 ......
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