郅克谦 徐燕 任文豪 高岭 赵璐 杨勇 张引成

    (西安交通大学医学院附属口腔医院 口腔颌面头颈肿瘤外科，陕西 西安 710004)

    不同方法制备抗原致敏的树突状细胞介导T淋巴细胞对Tca8113细胞杀伤作用的影响

    郅克谦 徐燕 任文豪 高岭 赵璐 杨勇 张引成

    (西安交通大学医学院附属口腔医院 口腔颌面头颈肿瘤外科，陕西 西安 710004)

    目的 探讨树突状细胞(DCs)疫苗治疗舌癌的可行性，并选择较优的抗原负载方式。方法 分别采用弱酸洗脱法、反复冻融法制备Tca8113细胞抗原，并分为3组：弱酸洗脱抗原组、反复冻融抗原组、对照组(不加肿瘤抗原)。从外周血单核细胞中诱导DCs，分离出T淋巴细胞。以不同效靶比将DCs和T淋巴细胞混合培养，MTT法测光密度值，计算刺激指数。DCs抗原负载后，与T淋巴细胞混合，以不同效靶比加入预先接种了Tca8113细胞的培养板。MTT法测光密度值，计算杀伤率。结果 2种方法体外成功地构建了DCs疫苗，抗原致敏组与对照组比较差异显著，且弱酸洗脱组优于反复冻融组。DCs疫苗可诱导细胞毒性T淋巴细胞有效的杀伤Tca8113细胞，并表现明显的剂量效应。结论 DCs疫苗致敏T淋巴细胞能够有效的杀伤Tca8113细胞，酸洗脱抗原冲击致敏的DCs疫苗在舌癌的免疫治疗中优于冻融抗原。

    树突状细胞； 舌癌； 免疫治疗

    以各种方式诱导机体产生肿瘤特异性T淋巴细胞免疫反应，已成为有效的临床抗肿瘤治疗手段。树突状细胞(dendritic cells，DCs)疫苗在恶性淋巴瘤、恶性黑色素瘤、前列腺癌等肿瘤的治疗中取得了令人鼓舞的疗效[1-2]。本研究选用舌癌Tca8113细胞系，弱酸洗脱法和反复冻融法2种方法获得肿瘤抗原，再与同种异体外周血来源DCs混合培养，获得负载不同抗原的DCs，然后将抗原负载的DCs与自体T淋巴细胞共同孵育，得到致敏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte，CTL)，与Tca8113细胞作用，检测其对舌癌细胞的杀伤效果，探讨DCs疫苗治疗舌癌的可行性，并选择较优的抗原负载方式。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂及仪器

    Tca8113细胞株(口腔疾病研究国家重点实验室，四川大学)，人淋巴细胞分离液(天津灏阳生物科技有限公司)，重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colonystimulating factor,rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(recombinant human interleukin-4 ......