贺慧霞 刘洪臣 王东胜 曹均凯 张海钟 鄂玲玲

    (中国人民解放军总医院 口腔医学研究所，北京 100853)

    牙周膜干细胞向脂肪细胞方向定向诱导分化实验

    贺慧霞 刘洪臣 王东胜 曹均凯 张海钟 鄂玲玲

    (中国人民解放军总医院 口腔医学研究所，北京 100853)

    目的 探讨人牙周膜干细胞(PDLSCs)向脂肪细胞定向分化潜能，分析其分化过程中形态与功能变化。方法 免疫磁珠法分离人PDLSCs，用成脂诱导液连续诱导21 d，通过倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪、RTPCR、Western blot及免疫荧光方法观察诱导细胞形态、结构变化，分析其表面脂肪细胞特异性标志——低密度脂蛋白(LPL)和过氧化物酶体增殖物受体γ(PPAR-γ)的基因及蛋白表达时相及表达量，油红O染色检测脂滴分泌情况。结果 诱导21 d，诱导细胞呈脂肪细胞样圆形细胞，超微结构观察可见胞浆中大量脂肪细胞特征性脂滴。流式分析结果显示，有96.54%的PDLSCs向脂肪细胞分化。诱导细胞表达脂肪细胞特异性表面标志LPL mRNA和PPAR-γ mRNA及PPAR-γ蛋白，且随诱导时间延长PPAR-γ蛋白表达量增加。诱导细胞产生油红O阳性染色的脂滴。结论人PDLSCs在适当条件下可定向分化为脂肪细胞样细胞，并具有脂肪细胞形态、结构和功能特点，具有可塑性。

    牙周膜干细胞； 诱导； 分化； 脂肪细胞

    牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSCs)是牙周组织发育完成后存留于牙周膜中未分化的间充质细胞。与骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells，BMSCs)相似，PDLSCs不仅具有自我更新的能力，还具有在一定诱导条件下向脂肪、软骨、神经、肌肉等多个非来源组织的不同细胞分化的潜能。目前研究[1-2]已证实，BMSCs具有分化为包括骨、韧带、脂肪、软骨、肌肉在内的几乎所有组织细胞的潜能，并可向不同胚层的细胞类型分化，成为多种组织或器官组织工程的种子细胞。PDLSCs也具有多向分化潜能，但目前有关PDLSCs横向分化的报道较少。本研究从细胞、分子及基因水平探讨PDLSCs向脂肪细胞分化的潜能、特点和机制，以进一步认识PDLSCs的生物学特性，为从不同角度认识PDLSCs的特性，研究其分化机制提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    LG-DMEM培养基、胎牛血清、L-谷氨酰胺(Gibco公司 ......