赵艳红 李洪发 王春玲 郑朝 付雅丽 魏福兰

    (1.天津医科大学口腔医院 正畸科，天津 300070；2.山东大学口腔医院 正畸科，山东 济南 250012)

    机械力作用下人牙周膜细胞Osterixm RNA和蛋白的表达

    赵艳红1李洪发1王春玲2郑朝1付雅丽1魏福兰2

    (1.天津医科大学口腔医院 正畸科，天津 300070；2.山东大学口腔医院 正畸科，山东 济南 250012)

    目的 研究在机械力作用下人牙周膜细胞内Osterix(Osx)mRNA和蛋白的表达变化，探讨Osx与正畸牙周组织骨改建的关系。方法 组织块法培养人牙周膜细胞，采用离心加力装置对细胞分别加载1、2、4、6、8、12 h的机械力。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot及细胞免疫荧光化学技术分别检测不同时间点Osx mRNA和蛋白的表达变化及其细胞定位。结果 在正常人牙周膜细胞中，Osx mRNA表达微弱，蛋白未见表达；在机械力加载4 h后，Osx mRNA表达开始明显增强(P1 材料和方法

    1.1 材料

    DMEM培养基(高糖)、胰蛋白酶(Sigma公司，美国)，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(杭州四季青生物工程材料有限公司)，波形丝蛋白和角蛋白抗体(武汉博士德生物工程有限公司)，即用型SP免疫组化检测试剂盒、FITC标记兔抗山羊IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司)，cDNA反转录试剂盒(Fermentas公司，美国)，聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluorid，PVDF)膜(Amersham Biosciences公司，瑞典)。

    IXZ-ILL100型倒置相差显微镜、CX71显微镜及照相系统(OLYMPUS公司，日本)，CO2细胞培养箱、台式冷冻高速离心机(Heraeus公司，德国)，5810R型高速台式离心机(Eppendoff公司，德国)，梯度PCR仪(Biometra公司，德国)，电泳槽、电泳仪、电转仪、制胶器(BIO RAD公司，美国)。

    1.2 方法

    1.2.1 人牙周膜细胞的原代培养和鉴定 取11～14岁青少年因正畸拔除的牙周健康的前磨牙。采用组织块法原代培养人牙周膜细胞，取第2代细胞爬片，用免疫组化SP法进行波形丝蛋白和角蛋白染色，进行来源鉴定。

    1.2.2 人牙周膜细胞的体外加力 本研究采用离心加力法对细胞加载机械力[10-11]。取生长良好的第2～3代人牙周膜细胞 ......