李昂 谢红帼 梁平 朱春晖 石建峰 饶国洲 苟建重

    (1.西安交通大学附属口腔医院口腔医学研究中心；2.牙周科，陕西西安710004)

    牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白Fim A基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化

    李昂1谢红帼2梁平2朱春晖2石建峰1饶国洲1苟建重2

    (1.西安交通大学附属口腔医院口腔医学研究中心；2.牙周科，陕西西安710004)

    目的克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因，构建原核表达载体，诱导其在大肠杆菌中融合表达，并鉴定、纯化其表达产物。方法克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因，构建表达载体pET15b-FimA，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyS感受态细胞；异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白，以抗6×His Tag单克隆抗体为一抗，Western blot鉴定、Co2+柱亲和层析纯化融合蛋白。结果克隆的FimA基因序列及插入表达载体中的FimA序列均与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性；IPTG诱导后Western blot鉴定4.1×104处有目的蛋白表达；Co2+柱亲和层析法获得纯化的高浓度FimA蛋白。结论本实验成功构建了牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因的原核表达载体pET15b-FimA，并在大肠杆菌中获得成功表达和纯化，为进一步制备牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白单克隆抗体和研制开发预防牙周炎的亚单位蛋白疫苗奠定了实验基础。

    牙龈卟啉单胞菌；菌毛蛋白A；融合表达

    牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis)是目前公认的一种牙周致病菌，其表面含有大量毒性因子，如蛋白酶、菌毛、脂多糖、血凝素等[1]。其中菌毛可介导P.gingivalis在口腔的定植黏附，诱导内皮细胞表达多种黏附分子、炎性细胞因子，促进破骨细胞的分化和成熟，导致牙槽骨的吸收，是P.gingivalis造成牙周组织侵袭性破坏的基础[2-4]。研究表明[5-6]，P.gingivalis菌毛蛋白具有良好的免疫原性，在体内能诱发保护性免疫反应，抑制多种炎症相关因子的产生，抵制P.gingivalis的黏附定植和进一步地侵袭破坏能力，阻断P.gingivalis感染后牙周组织受到破坏，是一种有潜力的牙周炎疫苗候选免疫原[7]。据此,本实验旨在通过基因克隆与重组技术构建P.gingivalis菌毛蛋白FimA基因的原核表达载体，并诱导其在大肠杆菌中表达，通过纯化以获得高浓度的FimA融合蛋白，为进一步制备P. gingivalis菌毛蛋白单克隆抗体和开发研制预防牙周炎的蛋白亚单位疫苗奠定基础 ......