王忠朝 范丽苑 蒋俊强 蔡炜 丁一

    (1.泸州医学院附属口腔医院 口腔内科；2.修复科，四川 泸州 646000；3.四川大学华西口腔医院 牙周病科，四川 成都 610041)

    噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究

    王忠朝1范丽苑2蒋俊强1蔡炜1丁一3

    (1.泸州医学院附属口腔医院 口腔内科；2.修复科，四川 泸州 646000；3.四川大学华西口腔医院 牙周病科，四川 成都 610041)

    目的 探讨噻唑蓝(MTT)法用于口腔常见细菌(变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌)活菌计数的可行性及具体应用过程中的实验条件。方法 本实验以菌落形成单位(CFU)法为标准对照。实验通过改变比色的波长、反应时间、试剂剂量、细菌菌龄等实验条件，获得MTT法测量常见口腔细菌的一系列参数，对变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌进行活菌计数，并与CFU法所测的细菌数量相比较。结果 MTT法在测量变异链球菌时，最佳的检测波长为510 nm，最佳的测定细菌范围是1.5×105～1.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量血链球菌时，最佳的检测波长为545 nm，最佳的测定细菌范围是1.5×105～2.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量伴放线菌嗜血菌时，最佳的检测波长为557 nm，最佳的测定细菌范围是1.0×106～5.0×107CFU·mL-1。MTT法与菌落形成单位法的测量结果是一致的，并且对于不同菌龄的变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌均适用。结论 MTT法可以用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等口腔常见细菌的活菌数量，并且具有快速、方便等优点。

    噻唑蓝比色法； 变异链球菌； 血链球菌； 伴放线菌嗜血菌； 活菌计数

    目前常用的活菌计数方法有菌落形成单位(colony formingunits，CFU)法、比浊法、显微计数法等[1]。但上述方法都存在一些不足之处，因此，希望找到一种快速、准确的活菌计数方法。四唑盐是一种能接受氢原子的染料，商品名为噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)。外源性MTT可以被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为难溶的蓝紫色结晶物甲臜，而死细胞无此作用。二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)可以溶解甲臜，该溶解液在一定波长下的光密度值(A值)可以间接反映活细胞数。在一定的细胞浓度范围内，A值与活细胞数成正比。MTT法目前主要用于细胞的计数、生物因子的活性检测、细胞毒性实验、抗肿瘤药物的大规模筛选等 ......