蒋文 边莉 李瑰琦 马丽菊 唐睿珠 何永文

    (1.昆明医学院附属口腔医院 口腔研究所，云南 昆明 650031；2.荆州市第一人民医院 口腔科，湖北 荆州 434000；3.昆明医学院第一附属医院 病理科，云南 昆明 650032)

    高温治疗癌症已在临床上得到较广泛应用，并取得较满意效果。近年研究发现，临床常规热疗(41～45℃)主要通过诱导肿瘤细胞凋亡治疗肿瘤，但分子学机制尚未完全清楚。蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)是哺乳动物细胞浆内的脂质依赖性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，参与调节细胞增殖、分化和死亡，可作为肿瘤治疗靶点[1-2]。其家族成员PKC-δ在不同类型的细胞中、不同刺激作用下可发挥促凋亡或抗凋亡的功能[3-4]。但其在热疗诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用尚待探索。因此，本研究以人舌鳞癌Tca8113细胞株为实验对象，应用PKC-δ的活化抑制剂Rottlerin研究热诱导Tca8113细胞凋亡时PKC-δ的作用，以期为临床肿瘤热疗提供新的治疗思路。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料及仪器

    人舌鳞癌Tca8113细胞株购自中国科学院上海细胞库，RPMI 1640培养基(Thermo公司，美国)，PKC-δ抑制剂Rottlerin(Alexis公司，瑞士)，二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)(Amresco公司，美国)，PKC-δ抗体(BD公司，美国)，羊抗鼠(Ⅱ抗)(KPL公司，美国)，碘化丙啶(propidium iodide，PI)、Rhodamine 123及Caspase-3活性检测试剂盒购自碧云天生物研究所。电热恒温水浴箱(江苏环保仪器厂)，Coulter Epics XL流式细胞仪(Beckman公司，美国)。DM LS2显微镜(Leica公司，德国)，DYY-7C型电泳仪(北京市六一仪器厂)，酶标仪(One Lambda公司，美国)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 Tca8113细胞于含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中(加青霉素1×105U·L-1、链霉素1×102mg·L-1)37 ℃，5%CO2条件下培养。

    1.2.2 细胞热处理 取对数生长期且密度为培养瓶面积的80%～90%细胞用于实验，分成2组，分别加入Rottlerin(DMSO配制，终浓度10 μmol·L-1)和等体积的DMSO预处理细胞30min。43℃水浴槽中加热细胞0、40、80、120min ......