杨柳 许晓芳 杨佰霞 柳雯 李颂

    (1.安徽医科大学口腔医学院 口腔内科教研室；2.安徽医科大学第一附属医院 检验科，安徽 合肥 230032)

    变异链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)是已知的人类口腔主要致龋菌[1]，它所产生的细菌素叫变链素(mutacin)[2]，变链素对与其密切相关的菌种和其他革兰阳性细菌具有抑制活性，变链素还具有最低抑菌浓度和抑制耐药菌株的特性，这些生物学特性都可能使变链素成为某些耐药抗生素的替换剂，逐渐走向治疗用途[3]。

    自1975年日本大阪大学牙科学院的Hamada等[2]把变异链球菌产生的细菌素样抑菌物质(bacteriocinlike inhibitory substances，BLIS)定义为变链素之后，不断有新的变链素被发现。Caufield研究小组在1999至2001年间相继分离纯化变链素Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ[4-6]，Novák等[7]于1994年提取出变链素Ⅱ。其他研究者也已经分离纯化了几种变链素，如变链素N、M46、M19、 H7[8-9]，变链素B-Ny266[3]，变链素1140[10]，2005年Hale等[11]从变异链球菌菌株UA159提纯出变链素Ⅴ，2006年Nicolas等[12]发现H-29B与变链素Ⅱ类似，2007年Robson等[13]分离出变链素K8，目前这些变链素都已进入蛋白质结构分析和基因分析阶段。

    但是由于变链素相对分子质量小，天然产量低，直接从细菌体内提取天然多肽物质时，分离提纯存在一定困难，而且步骤复杂，在一定程度上阻碍了国内外学者们对新变链素的发现和研究。本实验旨在探索和掌握变链素的分离纯化方法，为进一步从分子水平研究变链素奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 实验菌株

    前期研究中得到的80株S.mutans临床菌株，并经过抑菌活性检测，详见参考文献[14]，选择出抑菌活性最强的菌株1G(抑菌环平均直径为20mm)。指示菌株：口腔链球菌(Streptococcus oralis，S.oralis)ATCC 10557。

    1.2 主要试剂

    胰蛋白胨-多价蛋白胨-酵母提取物(tryptone polypepton yeast-extract，TPY)液体培养基。孔径0.22μm一次性滤器(Millipore公司，美国)。色谱分析柱tc-C18(Angilent tc-C18，4.6 mm×150 mm，Angilent公司，美国) ......