申涛 常慧君 简从相 杨彦春 周继祥

    (1.第三军医大学西南医院 口腔科，重庆 400038；2.四川省军区门诊部 口腔科，成都 610041)

    改良法分离培养人牙周膜干细胞

    申涛1常慧君2简从相1杨彦春1周继祥1

    (1.第三军医大学西南医院 口腔科，重庆 400038；2.四川省军区门诊部 口腔科，成都 610041)

    目的 改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC)，并进行鉴定。方法 采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞，通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC，用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代；测定克隆形成率；免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋白表达；流式细胞术分析细胞周期及表面标志物STRO-1、CD146的表达；并进行成骨、成脂诱导实验。结果 本研究所得细胞有较强的克隆形成能力，波形蛋白染色阳性，角蛋白阴性，细胞周期分析大多细胞处于G0/G1期，STRO-1及CD146高表达，成骨、成脂诱导实验证明所得细胞有多向分化能力。结论 改良法克隆化培养可成功分离得到PDLSC，为进一步研究PDLSC奠定了基础。

    人牙周膜干细胞； 鉴定； 细胞克隆

    随着干细胞研究的不断深入，越来越多的组织中发现有干细胞存在。近年证实，人牙周膜组织中也存在干细胞[1]，即牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSC)。研究[1-3]发现：PDLSC具有较强的克隆形成能力，体外诱导可分化为成骨细胞、成脂细胞、成软骨细胞及神经元样细胞，在体内可形成牙骨质/牙周膜样结构。牙周膜组织中的干细胞数量较少，且缺乏特定的标志物，文献亦未见特殊有效的分离方法报道。本研究在既往PDLSC分离纯化方法的基础上，进行了探索和改良，利用有限稀释法克隆化培养，对人PDLSC进行分离纯化，并证实所得细胞具有干细胞特性，为PDLSC的进一步研究和应用打下基础。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    α-MEM培养液(Hyclone公司，美国)，胎牛血清(Hyclone公司，美国)，Ⅰ型胶原酶(Gibco公司，美国)，0.25%胰蛋白酶(Hyclone公司，美国)；小鼠抗人AF647-STRO-1和PE-CD146流式抗体(Biolegend公司，美国)，小鼠抗人Vimentin单抗(BD公司，美国)，小鼠抗人pan-Cytokeratin单抗(Santa公司，美国)，Envision免疫组织化学试剂盒(Dako公司，丹麦) ......