李彦 牛忠英 汤楚华 包博 师天鹏 司少艳

    (1.解放军总医院 军医进修学院，北京 100853；

    2.解放军第306医院 全军口腔疾病诊治中心；3.病理实验科，北京 100101)

    三维培养模型中胰岛素样生长因子-Ⅰ对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

    李彦1，2牛忠英2汤楚华2包博2师天鹏2司少艳3

    (1.解放军总医院 军医进修学院，北京 100853；

    2.解放军第306医院 全军口腔疾病诊治中心；3.病理实验科，北京 100101)

    目的 了解胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在三维培养条件下对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法 通过组织块法分离培养hPDLCs。采用旋转细胞培养系统(RCCS)建立三维培养环境。将细胞分为4组，分别为阴性对照组、阳性对照组(三维培养组、IGF-Ⅰ组)、实验组(三维培养加IGF-Ⅰ组)。各组细胞分别培养1、3、5、7 d。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组各时间点细胞增殖情况，分光光度计法检测ALP活性。结果 与阴性对照组相比，三维培养加IGF-Ⅰ组细胞增殖自3 d时显著增加(P1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    双抗PBS液、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、DMEM培养基、谷氨酰胺、0.25%胰蛋白酶、抗坏血酸、甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)试剂(Gibco公司，美国)，IGF-Ⅰ、ALP检测试剂盒、Triton X-100、考马斯亮兰(Sigma公司，美国)，二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)、青霉素、链霉素(Amresco公司，美国)，抗波形丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体(Dako公司，美国)，流式细胞分析仪(Coulter公司，美国)，紫外线分光光度仪(Eppendorf公司，德国)，55mL旋转细胞培养体系(rotary cell culture system，RCCS)(Synthecon公司，美国)，软骨细胞微载体(Cytodex-3，GE Healthcare公司，美国)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞的培养和鉴定 经受试者知情同意后，收集因正畸拔除、牙周组织健康、无龋的新鲜前磨牙或第三磨牙共8颗，经双抗PBS液及DMEM液反复清洗后刮取根中1/3牙周膜组织，剪成1mm3的小块，以5mm间隔将所得组织块均匀接种于25 cm2培养瓶瓶底 ......