黄旭 赵鹃 毛英杰 谷志远

    (1.浙江大学医学院附属第一医院 口腔科，杭州 310003；

    2.浙江大学医学院附属口腔医院 修复科；3.颌面外科，杭州 310006)

    小鼠Dishevelled 2表达质粒的构建及其在RAW 264.7细胞中的表达

    黄旭1赵鹃2毛英杰3谷志远3

    (1.浙江大学医学院附属第一医院 口腔科，杭州 310003；

    2.浙江大学医学院附属口腔医院 修复科；3.颌面外科，杭州 310006)

    目的 构建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)表达质粒，并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达，为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础。方法 根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物，提取RAW264.7细胞总RNA，以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框(ORF)，并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上，酶切电泳，测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒。用脂质体介导瞬时转染RAW 264.7细胞，通过荧光显微镜观察转染效果，实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况。结果 成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体，酶切电泳和测序结果与目的基因相符；转染RAW264.7细胞后48 h，荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达；实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达。结论 成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2，瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平。

    Dishevelled 2； 表达质粒； RAW264.7细胞； 破骨细胞

    骨重建参与口腔医学的各个方面，如正畸牙的移动、种植体骨整合界面的形成、牙列缺失后牙槽骨的吸收等。研究骨重建的机理，选择适宜的靶点，一直是口腔医学研究及临床的热点。骨重建中，破骨细胞和成骨细胞不可或缺。破骨细胞功能的过度抑制或破骨细胞缺乏都会影响成骨细胞的骨形成[1-3]。而恢复破骨细胞的功能，则有助于形成正常的骨组织结构[4-5]。破骨细胞和成骨细胞间存在着双向ephrinB2/EphB4膜分子信号耦联，当成熟破骨细胞表面的ephrinB2和成骨前体细胞表面的EphB4相接触时，信号同时、双向传入成骨细胞(正向)和破骨细胞(逆向)，正向信号激活成骨细胞的分化，而逆向信号抑制破骨细胞的分化[6-7]。这项研究结果很好的解释了骨重建转换阶段中，破骨细胞骨吸收停止、活性消失，同时成骨细胞分化、活化 ......