刘培红 马肃 陈力

    (1.哈尔滨医科大学口腔医院 牙周科；2.哈尔滨医科大学第一临床医学院 科研科，哈尔滨 150001)

    环孢素对大鼠牙龈上皮细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

    刘培红1马肃1陈力2

    (1.哈尔滨医科大学口腔医院 牙周科；2.哈尔滨医科大学第一临床医学院 科研科，哈尔滨 150001)

    目的 观察环孢素(CsP)对大鼠牙龈上皮细胞凋亡活动、凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3表达的影响，探讨CsP致牙龈上皮增厚的可能机制。方法 SPF级7周龄雄性Wistar大鼠80只，随机分为实验组和对照组，每组又分为10、20、30、40 d亚组，实验组胃饲含CsP鲜牛奶，对照组胃饲等量鲜牛奶。经心灌注4%多聚甲醛，固定取材，制作下颌第一磨牙颊舌向石蜡切片，原位缺口末端标记(TUNEL)法检测牙龈上皮细胞原位凋亡，免疫组化PV两步法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。利用图像分析系统计算牙龈上皮细胞凋亡率和Caspase-3蛋白阳性细胞表达率，并测量Bcl-2蛋白平均灰度，行完全随机分组两因素析因设计方差分析。结果 实验组大鼠牙龈上皮内细胞凋亡率和Caspase-3蛋白阳性细胞表达率下调，与对照组有显著差异(P1 材料和方法

    1.1 药物、试剂和仪器

    CsP(商品名：新山地明，瑞士诺华制药有限公司)。兔抗鼠Bcl-2、Caspase-3多克隆抗体(武汉博士德有限公司)；原位缺口末端标记(TdT-mediated dUT nick endlabeling，TUNEL)法检测试剂盒(美国罗氏公司)；PV两步法免疫组织化学检测试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。Leica DM2500光学显微镜(德国莱卡公司)，Motic Med 6.0数码医学图像分析系统(北京麦克奥迪图像技术有限公司)。

    1.2 动物选择、分组和建模

    选取由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供的SPF级7周龄雄性Wistar大鼠80只，随机分为实验组和对照组，每组又分为10、20、30、40 d亚组，隔离器饲养，正常食水。实验组胃饲质量浓度为5mg·mL-1的CsP鲜牛奶混浊液，CsP摄入量为每天30mg·kg-1，对照组胃饲不含CsP的等量鲜牛奶。

    1.3 取材、TUNEL法及免疫组织化学染色

    按实验设计取材、固定、脱钙后，以下颌第一磨牙近中面为包埋面常规方法制作下颌磨牙区牙周牙体联合组织蜡块 ......