王璐 葛少华 王效英 杨丕山

    (山东大学口腔医学院·山东省口腔生物医学重点实验室，济南 250012)

    FHL家族蛋白是指由4个半LIM结构域组成的一类蛋白质，它们只含LIM结构域，是LIM-only家族的一部分。近年来研究发现，该家族中FHL2蛋白在成骨细胞分化中起着重要作用。在胞核内，FHL2可作为辅助催化剂与转录因子相互作用；在细胞质内，FHL2可与许多整合素结合传递和放大细胞信号。FHL2蛋白过表达可提高成骨分化标志物产生和基质矿化；反之，FHL2减少会抑制成骨细胞分化，降低骨形成量[1]。但FHL2在牙周膜细胞矿化过程中的作用尚未见相关报道。与成骨细胞一样，牙周膜细胞由间充质组织发育而来，且在一定条件下均有合成及分泌胞外胶原基质发生矿化的能力。由于牙周膜细胞与成骨细胞在功能和特征上有很多相似之处，故推测FHL2在牙周膜细胞可能有表达，且在分化、矿化中发挥一定作用。目前已知可以先体外培养牙周膜细胞，然后加入地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠等之后则建立了牙周膜细胞体外矿化模型[2-3]。本研究以人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells，hPDLCs)为研究对象，建立体外矿化模型，利用免疫细胞化学技术、半定量RT-PCR技术研究FHL2在牙周膜细胞体外分化、矿化过程中的表达。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂

    高糖DMEM(Gibco公司，美国)，β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、地塞米松(Sigma公司，美国)，TRIzol(大连宝生物有限公司)，RT-PCR试剂盒(TaKaRa公司，日本)，FHL2多克隆抗体(Santa Cruz公司，美国)，SP、DAB显色试剂盒(北京中杉金桥有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 标本取自临床上10～18岁青少年因正畸治疗而拔除的健康前磨牙，无菌条件下刮取根中1/3的牙周膜，组织块法培养，每隔3 d换液1次。培养液为含15%胎牛血清、青霉素100U·mL-1、链霉素100μg·mL-1的DMEM培养液。取3～5代牙周膜细胞进行研究。实验组培养液中加入10mmol·L-1β-甘油磷酸钠，50 μg·mL-1维生素C，5mol·L-1地塞米松液进行牙周膜细胞体外矿化诱导；对照组不加上述矿化诱导剂。

    1.2.2 茜素红染色检测矿化结节形成 取第4代牙周膜细胞以每毫升5×104个细胞密度接种于24孔板中的小盖玻片上 ......