车晓霞 赵彤 朱玲玲 郭杰

    (1.首都医科大学附属北京口腔医院 正畸科，北京 100050；2.军事医学科学院基础医学研究所 脑保护与可塑性研究室，北京 100850；3.山东大学口腔医院 正畸科；山东省口腔生物医学重点实验室，济南 250012)

    干细胞表面抗原-1(stem cell antigen-1，Sca-1)作为一种细胞表面标记常用于富集干细胞和前体细胞，最早发现于小鼠激活的淋巴细胞[1]，是一种由鼠Ly6基因家族编码，以糖基磷脂酰肌醇锚定的细胞表面蛋白，相对分子质量为18 000，定位于浆膜的脂质载体[2]。

    骨骼肌受到损伤后，在骨骼肌局部存留的干细胞和肌肉形成前体细胞激活、增殖、分化并融合形成多核肌细胞，修复或替代受损的组织[3-4]。这对于维持骨骼肌在运动和老化过程中的动态平衡非常重要。实验证实表达Sca-1的细胞在体内和体外都可以分化为骨骼肌，也可以生成造血细胞和间充质细胞[5-6]。在细胞移植治疗中，Sca-1+细胞存活率高[7]，靶基因治疗效果好，但目前对这种细胞表面蛋白的功能尚不明了。

    成肌调节因子(muscle regulatory factor，MRF)在肌肉细胞种系决定和分化中起重要作用。其中MyoD和成肌素(Myogenin)都属于MRF，MyoD作为原发的转录因子，在成肌种系决定中起作用[8]，见于激活的卫星细胞；Myogenin作为继发的转录因子，在肌肉终末分化时表达[9]。本研究对比观察了Sca-1+与Sca-1-细胞在体外培养过程中的生长特性及MRF表达的特点，希望获得实验线索以说明Sca-1在细胞增殖分化过程中所发挥的功能作用。

    1 材料和方法

    1.1 小鼠原代成肌细胞的分离和培养

    将4周龄C57BL/6小鼠脱颈处死，75%乙醇消毒小鼠后肢皮肤，剪开皮肤，剔去脂肪和筋膜，剪取后肢肌肉组织，立即放入预冷的DMEM中漂洗3次。将肌肉小块转移至无菌的小烧杯中，用眼科剪充分剪碎成浆状，加入组织混合酶(2.4 U·mL-1分散酶、0.2%Ⅱ型胶原酶、2.5mmol·L-1CaCl2)，37℃消化45min，每间隔15min用吸管反复吹吸若干次。用含20%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的生长液终止消化，200目细胞筛选过滤，1 400 r·min-1离心10min ......