魏魁杰 张雷 杨筱 韩伟 钟来平 叶冬霞 张志愿

    (1.湖州师范学院医学院 口腔系，湖州 313000；2.上海交通大学医学院附属第九人民医院 口腔颌面外科，上海 200011)

    口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，患者5年生存率约为50%，对于肿瘤晚期和复发患者，生存率更低[1]。因此寻找有效的生物标志物、阐明其发病机制十分重要。

    本研究利用口腔黏膜上皮体外癌变模型[2-3]，在前期工作中采用比较蛋白质组学技术，鉴定出癌变形成细胞较永生化细胞高表达的细胞角蛋白17(cytokeratin 17，CK17)。CK17是构成细胞骨架的一种酸性多肽，在乳腺癌、子宫颈癌、肺癌等多种恶性肿瘤中高表达[4-7]。本研究旨在探讨CK17在口腔黏膜上皮体外癌变模型、口腔鳞癌细胞株及临床组织标本中的表达情况及临床意义，以期为口腔鳞癌的诊断和预防提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 试剂与器材

    细胞培养基Defined keratinocyte-SFM、DMEM和RPMI-1640(Gibco公司，美国)，RNA提取试剂(Invitrogen公司，美国)，实时荧光定量试剂盒(TaKaRa公司，日本)，Western鼠抗荧光抗体(Fermentas公司，立陶宛)，EnVision鼠兔共抗二抗(Dako Cytomation公司，丹麦)，CK17鼠抗人单克隆抗体(Millipore公司，美国)，Odyssey激光成像分析系统(LI-COR Biosciences公司，美国)。

    1.2 细胞培养

    口腔黏膜上皮体外癌变模型中的永生化细胞(human immortalized oral epithelia cell，HIOEC)、HB56及HB96细胞、舌鳞癌细胞株Tca8113均由上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颌面外科肿瘤生物实验室建系，舌鳞癌细胞株TSCC由武汉大学口腔医学院建系并惠赠，CAL27购自美国American Type Culture Collection(ATCC)公司，口腔鳞癌细胞株OSC由日本高知大学医学院惠赠。HIOEC采用Defined keratinocyte-SFM培养，HB56、HB96和CAL27采用DMEM(含10%FBS，2×105U·L-1青、链霉素)培养，Tca8113、TSCC、OSC细胞用RPMI-1640(含10%FBS，2×105U·L-1青、链霉素)培养 ......