武影 束蓉 刘宏伟

    (1.同济大学附属口腔医院 牙周科，上海 200072；2.上海交通大学医学院附属第九人民医院 牙周科，上海 200011)

    唾液是人体的一面镜子，许多疾病都可以在唾液中找到相关的蛋白分子标记物，如舍格伦综合征、类风湿病、高血压、糖尿病等。尽管利用唾液检测诊断全身性疾病有较大发展但应用于口腔疾病的研究还很少，而且主要用于口腔癌的早期诊断和预后判断[1]。目前已有涉及牙周病的唾液蛋白组学研究[2-3]。

    众所周知，慢性牙周炎是与全身性疾病密切相关的多因素疾病，其发病机制尚不清楚。利用慢性牙周炎患者和健康对照者的非刺激性全唾液(whole unstimulated saliva，WUS)，通过蛋白组学方法，即双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)结合基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱检测二者唾液中的差异，并对差异蛋白质点进行鉴定，为今后揭示慢性牙周炎的机理奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 实验对象

    根据1999年美国牙周病分类国际研讨会提出的慢性牙周炎(chronic periodontitis，CP)的诊断标准[4]，从上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周科就诊的患者中随机选取5例CP患者。同时选取5例健康对照者，牙龈探诊出血的位点<10%，探诊深度<3mm，附着丧失>2mm的位点不超过1%，X线片显示无牙槽骨吸收。各组均有3名男性，2名女性；CP组和对照组平均年龄分别为46、42岁。2组共同纳入标准：全身无系统性疾病；妇女未处于怀孕期及哺乳期；半年内未做过牙周基础治疗；最近3个月未服用过抗生素；全口无龋者；无抽烟者。

    1.2 WUS的采集和处理

    按照Rhodus改良的方法采集WUS[5]。每人平均采集1.2mL唾液，采集后立即加入蛋白酶抑制剂(Sigma公司，美国，每毫升唾液加入100μL)。将所得样本在4℃条件下离心，先1 300 g，5min，去除食物残屑等；然后20 000 g ......