杜令倩 杨丕山 赵宁 葛少华

    (1.山东大学口腔医院 牙周科；2.山东大学第二医院 牙周科；3.山东省口腔生物医学重点实验室，济南 250012)

    牙周炎可导致牙周附着丧失、牙槽骨破坏和吸收。牙周病治疗的主要目标是获得牙周组织再生[1]。牙周组织再生性治疗的效果很大程度上依赖于病损局部残留的牙周再生性细胞的数量和质量，然而由于长期慢性炎症的影响，病损区域牙周再生性细胞的数量不足、功能不佳。如何获取足够的牙周再生性细胞是牙周病治疗的关键[2]。从人牙周膜组织中分离的人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSCs)具有自我更新的能力并有多向分化潜能，在适当的培养条件下能分化为成牙骨质样细胞、成骨细胞、脂肪细胞和胶原形成细胞，并且在动物牙周缺损模型中能够引起牙周膜组织的再生和牙槽骨高度的恢复[2-3]，因而被认为是牙周组织再生的主要功能细胞。

    牙周组织再生过程的关键是有足够量的功能细胞迁移到组织缺损区域，发挥干细胞作用，重建牙周组织。骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)是目前在牙周组织再生工程中研究和应用最多的多肽生长因子之一[4]。其能够促进牙周膜细胞的增殖及胞外基质蛋白的合成，能够促进牙周膜干细胞的成骨分化和骨形成[5]，诱导牙槽骨再生。目前关于BMP-2对PDLSCs的趋化效应却知之甚少。为此，本研究旨在观察人PDLSCs对BMP-2的趋化反应。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    高糖DMEM培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)(Hyclone公司，美国)，Ⅰ型胶原酶、DispaseⅡ、胰蛋白酶(Gibco公司，美国)，双抗、PBS液、地塞米松、维生素C、β-磷酸甘油钠、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX)、牛胰岛素(上海Solarbio生物科技有限公司)，70μm筛网(Falcon公司，美国)，波形丝蛋白抗体、角蛋白抗体(武汉博士德生物工程有限公司)，5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU)(Sigma-Aldrich，St Louis，MO，美国)，BrdU抗体、BMP-2(Santa Cruz公司，美国)，FITC荧光标记二抗、4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(4’，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)(北京中杉金桥生物科技有限公司) ......