靳路远 罗小良 姜艳 谢晓莉

    (中南大学湘雅医院 口腔科，长沙 410008)

    根尖周炎是口腔科的常见病、多发病，治疗的最终目的是使已经破坏的根尖周组织包括根尖周的牙周膜和牙槽骨再生并形成新附着，患牙能行使正常功能。根尖周组织再生的基础是牙周膜成纤维细胞，它在细胞外基质的产生与代谢方面具有重要作用，在一定条件下还能分化成骨组织[1]。研究[2]表明：牙周膜成纤维细胞具有一定的免疫潜能，受到微生物致病成分刺激后能分泌多种细胞因子，在牙周和根尖周组织的免疫反应中起重要的调节作用。

    根尖周炎的发生与根尖生物膜的存在密切相关，该生物膜是以革兰阴性厌氧菌及革兰阳性菌为主的混合体，是根尖周炎发生的主要病原学基础。粪肠球菌(Enterococcus faecalis，E.faecalis)是顽固性或继发性根管感染中检出频率最高的革兰阳性细菌之一，也是难治性根尖周炎的主要致病菌[3-4]。其细胞壁有效成分脂磷壁酸(lipoteichoic acid，LTA)是其主要免疫原，能有效激活免疫系统，诱发宿主炎症反应。目前认为：跨膜蛋白Toll样受体2(Toll like receptor 2，TLR2)可将LTA信号直接传导到细胞内，引起一系列细胞免疫反应，导致白细胞介素(interleukin，IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等重要炎症介质的分泌[5]。本文通过研究体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells，HPDLCs)在E.faecalis LTA刺激下TLR2以及IL-1β的表达变化，以阐明E.faecalis LTA在根尖周炎中的作用。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂与设备

    DMEM细胞培养液(Gibco公司，美国)、胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)、pH值为7.2～7.4的PBS缓冲液(自配)；E.faecalis LTA、大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)(Sigma公司，美国)，藻红蛋白(phycoerythrin，PE)荧光标记的TLR2抗体、PE荧光标记的IgG同型对照抗体、TLR2中和抗体、IgG同型质控抗体(eBioscience公司，美国)，IL-1β酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)96孔试剂盒(深圳晶美公司)。

    1.2 HPDLCs体外培养及鉴定 ......