富血小板血浆对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响(3)
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参见附件。
国)，XL30 ESEM-FEG场发射环境扫描电子显微镜(scanning electron microscope，SEM)(FEI公司，美国)。
1.2 方法
1.2.1 PRP制备 选择1名健康志愿者，在无菌条件
下用含枸橼酸钠抗凝剂的3 mL采血管采集静脉血
2 mL，置于低温高速离心机中20 ℃下离心。第1次离心(3 000 r·min-1)4 min，全血分为血浆层、白膜层、红细胞层[5]。吸取全部血浆、白膜层及其下1～2 mm
红细胞层，移入另一无抗凝剂的采血管中，第2次离心(3 000 r·min-1)13 min，血液再次分层，吸去上层3/4血浆即贫血小板血浆(platelet poor plasma，PPP)，余下的即PRP，约350 μL，置于EP管中，-80 ℃冻存。实验时按体积比10∶1加入含人凝血酶500 U·mL-1的10%氯化钙，其中氯化钙中和抗凝剂，凝血酶激活血小板α颗粒；室温静置10 min，使生长因子充分释放，再次离心(12 000 r·min-1)5 min，提取萃取液[6]
加入细胞培养基。
1.2.2 ALP染色[7] 实验分4组。24孔板加1 cm×1 cm玻片，调整细胞悬液密度为每毫升1×105，每孔500 μL种板，长至60%～70%时加入体积分数分别为0(对照组)、1%、2%、3%的PRP。加PRP后第4天 ......
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