吸烟和细胞色素P450 1A1-MspⅠ、谷胱甘肽硫转移酶T1基因多态性与口腔癌的相关性研究(3)
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参见附件。
1.2.2 GSTT1多态性分析 用多重PCR技术同时检测GSTT1基因,β-globin为内对照。参照相关文献[1],分别构建GSTT1和β-globin基因的扩增引物。扩增GSTT1的引物为:5’-TCTCCTTACTGGTCCTCAC-ATCTC-3’和5’-TCACCGGATCATGGCCAGCA-3’;
扩增β-globin的引物为5’-CAACTTCATCCACGTTC-ACC-3’和5’-GAAGAGCCAAGGACAGGTAC-3’。引物由上海Sangon公司合成。PCR体系为25 μL,其中10×buffer 2.5 μL,4×dNTP 1 μL,25 mmol·L-1 MgCl2 3 μL,50 μmol·L-1引物1 μL。扩增参数:95 ℃预变性5 min,然后95 ℃变性45 s,58 ℃退火45 s,72 ℃延伸45 s,35个循环后72 ℃延伸10 min。取5 μL PCR
扩增产物作2%琼脂糖凝胶电泳。加入DL 2000 Mar-
ker,40 min后于紫外线透射分析仪上观察结果。DNA样本经PCR扩增后产生480 bp片段者为GSTT1阳性
(+),无相应扩增产物者为纯合子基因缺失即GSTT1阴性(-)(图2)。
1.3 统计方法
分别计算病例组和对照组的GSTT1和CYP1A1- MspⅠ基因型分布,两组间的差异采用四格表?掊2检验,各基因型口腔癌风险的调整比值比(odds ratio ......
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