牙龈卟啉单胞菌PG0839基因突变株的构建(2)

http://www.100md.com 2012年2月1日 刘静波 潘亚萍 李琛 林莉 钟鸣

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    参见附件。

     1 材料和方法

    1.1 主要试剂、仪器和实验菌株

    脑心浸液(brain heart infusion，BHI)培养基(Di-fco Laboratories，美国)；DNeasy Tissue Kit(Qiagen公司，德国)；PrimeSTAR HS DNA聚合酶，DNA A-Tailing试剂盒，Dephospharylation(BAP)试剂盒，DNA片段纯化试剂盒，DL 2000 DNA Marker，λ-Hind

    ⅢDNA Marker，pUC19载体，引物(大连宝生物工程有限公司)；TGRADIENT型PCR扩增仪(Biometra公

    司，德国)；ECM630型电穿孔仪(BTX公司，美国)。

    本研究采用了4种菌株。P.gingivalis W83由美国佛罗里达大学牙科学院口腔微生物研究所Lamont RJ教授惠赠，P.gingivalis ATCC 33277和变异链球菌(Streptococcus mutans，S.mutans)ATCC 2517由首都

    医科大学口腔医院提供，大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)JM109购自大连宝生物工程有限公司。

    1.2 细菌培养

    P.gingivalis W83菌株接种于新鲜配制的含有5%无菌脱纤维羊血、氯化血红素(5 μg·mL-1)和维生素K(0.5 μg·mL-1)的BHI培养基，37 ℃厌氧培养5～7 d(10% H2、10%CO2、80%N2)[3] ......

    http://www.100md.com/html/paper/1000-1182/2012/02/20-1.htm

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