Toll样受体2和4在脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞表达细胞核因子-κB受体活化因子配基中的作用(3)
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1.2.2 实验分组 A组：对照组。B组：LPS刺激组，其中B1、B2、B3组中LPS质量浓度分别为100 ng·mL-1、1 μg·mL-1、10 μg·mL-1。C组：预先加入anti-TLRs抗体的LPS刺激组，其中C1、C2、C3组中分别预先加
入anti-TLR2+anti-TLR4抗体、anti-TLR2抗体、anti-TLR4抗体。
1.2.3 LPS刺激HPDLFs 取对数生长期的第5～8代HPDLFs，以每毫升5×104个细胞的密度接种于96孔板，每孔200 μL，5%CO2、37 ℃细胞培养箱中培养48 h。待细胞生长达到80%融合时，吸去培养上清液，B组加入预先配制的含100 ng·mL-1、1 μg·mL-1、10 μg·mL-1 LPS的DMEM培养液，A组加入不含LPS的DMEM培养液。每孔加液200 μL，复种3孔。加液后，分别于6、12、24、48 h吸取细胞条件培养液，以150 μL分装于EP管中，-20 ℃保存备用。
1.2.4 抗体预处理HPDLFs 同样取对数生长期的第5～8代HPDLFs，以每毫升5×104个细胞的密度接种于96孔板，每孔200 μL，5%CO2、37 ℃细胞培养箱中培养48 h。待细胞生长达到80%融合时，吸去培养上清液，在C1、C2、C3组中分别加入anti-TLR2+anti-TLR4、anti-TLR2、anti-TLR4抗体，其抗体滴度又分为1∶500、1∶250、1∶100、1∶50、1∶25 ......
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