血管内皮生长因子和转化生长因子β1基因调控人根尖乳头细胞矿化相关因子的研究(3)

http://www.100md.com 2012年5月1日 杨海兵 韩萱 杨琳 王燕

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    参见附件。

     2 mL，孵育6 h后，改用15%胎牛血清的α-MEM培养。

    实验分为未转染组(空白组)、转染pcDNA3.1hisA组(对照组)、转染pcDNA3.1hisA-VEGF165组(实验1组)、转染pcDNA3.1hisA-TGFβ1组(实验2组)以及共转染pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1组(实验3组)。

    1.2.7 RNA提取及逆转录反应 转染48 h后，提取细胞总RNA并按PrimeScript RT reagent Kit With gDNA

    Eraser(Perfect Real Time)的说明进行逆转录反应，cDNA于-20 ℃保存。

    1.2.8 实时定量PCR检测基因转染效率及BSP、DSPP、DMP1、OCN mRNA的表达 实验引物由大连宝生物公司设计合成(表1)。SYBR Green Ⅰ实时定量

    PCR反应体系包括：cDNA 1 μL、正向和反向引物(10 μmol·L-1)各0.8 μL、SYBR Premix Ex Taq 10 μL、去离子水7.4 μL，总体积20 μL。扩增条件：95 ℃

    30 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共45个循环。

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    http://www.100md.com/html/paper/1000-1182/2012/05/05-2.htm

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