微小核糖核酸—21反义寡核苷酸对人舌鳞癌细胞生长抑制的体内研究(2)
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参见附件。
1.2.7 裸鼠肿瘤组织实时荧光定量聚合酶链反应(po-lymerase chain reaction，PCR)、苏木精-伊红(hema-
toxylin-eosin，HE)及TUNEL检测 治疗后第28天断颈处死所有裸鼠，解剖原位肿瘤，提取RNA后行实时荧光定量PCR检测miR-21表达；原位肿瘤及肿大淋巴结常规石蜡包埋切片，HE染色行肿瘤组织病理检查；石蜡切片FITC标记POD法进行TUNEL实验，检测细胞凋亡，阳性结果判断标准：紫外光下所有细胞核均被染成蓝色，在495 nm激发波长下可在荧光显微镜下看到凋亡细胞细胞核的绿色荧光。每张切片随机选取8个视野(400×)，每个视野至少计数100个细胞，计算细胞凋亡指数，以百分比表示。
1.3 统计学分析
采用SPSS 10.0统计软件包对所有数据进行统计分析，实时荧光定量PCR采用ANOVA单因素方差分析；计量资料(或经转换后变为计量资料)多组间均数的比较采用单因素方差分析；光子数和细胞数的关系分析采取二元变量的相关分析，P<0.05作为检验水准。
2 结果
2.1 Tca8113细胞G418最佳筛选浓度
Tca8113细胞G418最佳筛选浓度为400 μg·mL-1。筛选稳定表达荧光素酶基因的Tca8113-luc细胞时所用浓度为基准浓度高一级，即600 μg·mL-1，维持浓度为筛选浓度的半量，即300 μg·mL-1。
2.2 Tca8113-luc细胞荧光素酶活性检测
Tca8113-luc细胞经过G418筛选后 ......
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