p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在应力调控成肌细胞分化中的作用(2)
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1.2.3 Western blot免疫印迹检测p38MAPK信号通路蛋白表达水平 按蛋白提取试剂盒裂解细胞，提取细胞蛋白定量，按每孔10 μg·L-1蛋白量上样，电泳
2 h后电转至聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride，PVDF)膜上，以50 g·L-1脱脂牛奶/TBST封闭1 h。将孵育磷酸化一抗p-p38(1∶1 000)显色曝光过的PVDF膜置于抗体洗脱液中，50 ℃下摇床振摇60 min；TBST洗涤10 min×3；重新加入总蛋白一抗p38(1∶1 000)孵育，余步骤同前。同上方法准备HRP标记羊抗兔IgG(1∶2 000)，室温孵育，余步骤同前。
1.2.4 Western blot免疫印迹检测周期性张应力以及p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB203580对成肌素(Myogenin)蛋白表达水平的影响 按蛋白提取试剂
盒裂解细胞，提取细胞蛋白定量，按每孔10 μg·L-1蛋白量上样，电泳2 h后电转至PVDF膜上，以50 g·L-1脱脂牛奶/TBST封闭1 h。将孵育磷酸化一抗Myogenin(1∶1 000)显色曝光过的PVDF膜置于抗体洗脱液中，50 ℃下摇床振摇60 min；TBST洗涤10 min×3；重新加入总蛋白一抗β-actin(1∶1 000)孵育，余步骤同前。同上方法准备HRP标记羊抗兔IgG(1∶2 000)，室温孵育，余步骤同前。
1.2.5 主要观察指标 主要观察指标：1)细胞形态学观察；2)采集p-p38及p38免疫印迹图分别记为Ap-p38、Ap38 ......
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