内皮细胞型一氧化氮合成酶Glu298Asp基因多态性与牙周炎伴Ⅱ型糖尿病的相关性研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
振荡混匀，55 ℃水浴3 h，煮沸8 min，-20 ℃保存。
1.2.2 eNOS Glu298Asp多态性目的基因的扩增和酶切 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)检测eNOS Glu298Asp的基因多态性。
引物(大连宝生物工程有限公司)序列为：上游引物5’-AAGGCAGGAGACAGTGGATGGA-3’，下游引物5’-CCCAGTCAATCCTTTGGTGCTCA-3’。PCR反应体系(25 μL)：DNA模板6 μL，2×Taq PCR Master-Mix 12.5 μL，上下游引物各1.25 μL，dd H2O 4 μL。吹打后轻弹管壁混匀，1 000 r·min-1瞬时离心。
聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)循环参数：94 ℃变性5 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 1 min，72 ℃ 30 s，共35个循环；72 ℃延伸10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳分析证实PCR扩增成功，取纯化后的PCR产物，限制性内切酶Ban Ⅱ(成都宝信生物技术有限公司，目录号N1215006)酶切，恒温水浴箱37 ℃水浴过夜。酶切片段经2.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色后通过UV凝胶成像系统判定结果。
1.3 PCR质量控制措施
在盲法下测定所有标本 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。