富血小板纤维蛋白与富血小板血浆体外释放生长因子的比较及其对脂肪干细胞增殖分化的影响(2)
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参见附件。
1.4 PRF与PRP析出液的制备
PRF制备:无菌抽取兔耳中央动脉血10 mL至真空负压管中,立即于3 000 r·min-1离心15 min,兔血可分为3层,最底层为红细胞层(red blood cells,RBC),表层为贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP)层,中间层即为PRF。
PRP制备:无菌抽取兔耳中央动脉血10 mL至含枸橼酸钠抗凝剂的负压管中,1 000 r·min-1离心15 min,吸取上清液及交界面下1~2 mm深的红细胞至另一个离心管内,3 000 r·min-1离心8 min,弃去上清液的上3/4,轻轻振荡后即为PRP。将PRP与凝血剂(含10%氯化钙和1 000 U凝血酶)混合后摇匀,PRP即被激活呈凝胶状。
将制备好的PRF与PRP分别置入含5 mL α-MEM培养液的离心管中,37 ℃条件下静置,于1、7、14、21、28 d时收集PRF和PRP析出液,在每个时间点取出析出液后,再于离心管中加入5 mL新鲜的α-MEM培养液,待下一个时间点收集析出液。实验前将收集的析出液-80 ℃保存备用。
1.5 TGF-β1与PDGF-AB质量浓度的测定
使用ELISA试剂盒对PRF和PRP析出液中TGF-β1与PDGF-AB的质量浓度进行检测,按照试剂盒说明书进行操作 ......
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