不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定(2)
 |
| 第2页 |
 |
| 第1页 |
参见附件。
引物的设计：根据GenBank提供的基因序列并参考文献，设计spaP[3]、gtfB[4]和dexA[5]特异性引物(表1)，由美国Invitrogen公司中国分公司合成。
细菌基因组DNA的提取：根据参考文献[3-5]提取细菌基因组DNA，用紫外分光光度仪进行定量测定。
以基因组DNA为模板，通过合成的特异性引物，利用PCR的方法，从中钓取目的基因片段。1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。PCR反应体系：10×Taq Buffer 5 μL，dNTP(每种核苷酸2.5 mmol·L-1)4 μL，上游引物
(25 pmol·μL-1)1 μL，下游引物(25 pmol·μL-1)1 μL，基因组DNA 1.5 μL，Taq DNA聚合酶(2 U·μL-1)
0.5 μL，加灭菌去离子水补齐至50 μL；PCR反应条件：95 ℃ 10 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，72 ℃ 10 min，共30个循环反应。
1.5.5 基因分型鉴定[6] 使用OPA5引物[7](5’-AGG-GGTCTTG-3’)以随机引物PCR完成基因分型鉴定。
PCR反应体系：5 μL 10×Taq Buffer，300 μmol·L-1 dNTP(每种核苷酸2.5 mmol·L-1)，100 pmol引物，5 μL基因组DNA，5 U Taq DNA聚合酶，加灭菌去离子水补齐至50 μL；PCR反应条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 1 min，36 ℃ 2 min，72 ℃ 2 min，72 ℃ 5 min ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。