脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响(2)
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10-6 mol·L-1、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤125×10-6 mol·L-1、胰岛素10 mg·L-1、α-MEM培养液)培养，隔日换液。培养3周后吸弃培养液，PBS清洗，10%多聚甲醛固定10 min，PBS清洗2次，油红O染色10 min，去离子水清洗3次。对照组仅用α-MEM培养液，其他步骤不变。倒置显微镜下观察。
1.4 MTT法检测HPDLSCs的增殖能力
实验分为3组，A组用含有10 μg·mL-1 LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs，B组采用含有10 ng·mL-1 LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs，C组(对
照组)采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。LPS刺激单核细胞上清液的制备方法：分离人外周血单核细胞，用含有10 ng·mL-1 LPS的α-MEM培养液37 ℃培养3 d，收集培养上清液，经0.22微孔滤膜过滤后置冻存管中-20 ℃保存备用，复温至37 ℃解冻可用。
每组取第3代HPDLSCs接种于每孔2×103个细胞的96孔培养板内。隔日换液，每日每组分别取5个复孔，MTT法测各孔光密度(optical density，OD)值，连测
7 d，以时间为横轴、细胞数为纵轴绘制生长曲线。
1.5 RT-PCR检测HPDLSCs的IL-1β、IL-6和TNF-α
mRNA的表达
实验分组方法同1.4。采用Trizol总RNA一步法提取细胞RNA。cDNA合成体系为20 μL，按照逆转录试剂盒说明书，采用随机引物法将RNA逆转录为cDNA ......
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