压应力对小鼠单核细胞RAW264.7 DNAX活化蛋白12、抗酒石酸酸性磷酸酶表达的影响(2)

http://www.100md.com 2013年4月1日 黄生高 凌天牖 钟孝欢等

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    参见附件。

     1.4.2 逆转录生成cDNA第一链 取1 μg总RNA，按逆转录试剂盒说明进行逆转录，生成20 μL cDNA第一链。

    1.4.3 PCR扩增 实验引物序列具体如下。DAP12上游引物序列：5’-GGCTGGGATTGTTCTGGGTGAC-3’，下游引物序列：5’-CCGCTGATGGGCATAGAG-TGG-3’。TRAP上游引物序列：5’-ACACAGTGAT-GCTGTGTGGCAACTC-3’，下游引物序列：5’-CC-AGAGGCTTCCACATATATGATGG-3’。GAPDH上游引物序列：5’-AAGCCCATCACCATCTTCCA-3’，下游引物序列：5’-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3’。

    按照TaKaRa TaqTM PCR试剂盒说明生成20 μL PCR产物。PCR扩增条件如下。DAP12：94 ℃预变性5 min，开始循环94 ℃ 20 s，58 ℃退火20 s，72 ℃延伸25 s，共35个循环，72 ℃彻底延伸10 min，4 ℃保存。TRAP：94 ℃预变性5 min，开始循环94 ℃ 30 s，58 ℃退火30 s ......

    http://www.100md.com/html/paper/1000-1182/2013/04/08-1.htm

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