压应力对小鼠单核细胞RAW264.7 DNAX活化蛋白12、抗酒石酸酸性磷酸酶表达的影响(2)
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参见附件。
1.4.2 逆转录生成cDNA第一链 取1 μg总RNA,按逆转录试剂盒说明进行逆转录,生成20 μL cDNA第一链。
1.4.3 PCR扩增 实验引物序列具体如下。DAP12上游引物序列:5’-GGCTGGGATTGTTCTGGGTGAC-3’,下游引物序列:5’-CCGCTGATGGGCATAGAG-TGG-3’。TRAP上游引物序列:5’-ACACAGTGAT-GCTGTGTGGCAACTC-3’,下游引物序列:5’-CC-AGAGGCTTCCACATATATGATGG-3’。GAPDH上游引物序列:5’-AAGCCCATCACCATCTTCCA-3’,下游引物序列:5’-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3’。
按照TaKaRa TaqTM PCR试剂盒说明生成20 μL PCR产物。PCR扩增条件如下。DAP12:94 ℃预变性5 min,开始循环94 ℃ 20 s,58 ℃退火20 s,72 ℃延伸25 s,共35个循环,72 ℃彻底延伸10 min,4 ℃保存。TRAP:94 ℃预变性5 min,开始循环94 ℃ 30 s,58 ℃退火30 s ......
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