高迁移率族蛋白N2对人舌癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用研究(2)
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瘤抑制作用。
1 材料和方法
1.1 材料来源
4～6周龄BALB/c裸鼠24只，均为雄性，体重15～20 g，购自四川大学实验动物中心；Tca8113人舌癌细胞株，由四川大学华西口腔医院口腔疾病研究国家重点实验室保存。
1.2 实验方法
1.2.1 HMGN2蛋白的提取 将含有原核表达载体pGEX-HMGN2的大肠杆菌50 ?L接种于含氨苄青霉素的5 mL Luria-Bertani(LB)液体培养基中，于37 ℃、200 r·min-1振荡过夜，然后于含氨苄青霉素的1 000 mL LB培养液中增菌，振荡摇菌6 h，加入终浓度为0.4 mmol·L-1的异丙基硫代半乳糖苷(iso-propyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG)诱导过夜，离心收集剩余细菌，每克菌(湿重)中加入含0.4 mmol·L-1苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF)的3 mL RIPA细胞裂解液，重悬细菌，冰上裂解20 min、超声裂解2 min以裂解细菌，于1.4×104 r·min-1离心20 min，收集上清，用0.22 mm过滤器过滤后，用B-PER GST融合蛋白纯化试剂盒进行纯化，加入5 U凝血酶酶切融合蛋白(酶切条件37 ℃、3 h)，酶切后收集HMGN2蛋白，-20 ℃收集保存。
1.2.2 人舌癌裸鼠模型的建立 人舌癌细胞株Tca8113在含有10%小牛血清的RPMI 1640培养液中于37 ℃、5%CO2条件下常规培养，待细胞长至90%汇合时，收集细胞，在完全RPMI 1640培养基中制备细胞悬液。于24只裸鼠右侧腋下进行Tca8113细胞悬液皮下接种，每只接种0.1 mL(含活细胞数约5×106个) ......
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