体外模拟间质液压升高对涎腺腺样囊性癌细胞增殖和侵袭能力的影响(2)
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1.2 实验方法
1.2.1 细胞培养 ACC-2细胞培养在含质量分数10%小牛血清、100 U·mL-1青霉素及100 μg·mL-1链霉素的RPMI 1640培养基中，于37 ℃、5%CO2培养箱中孵育，细胞采用0.25%胰蛋白酶消化后进行传代，稳定传代3～4代后，待细胞生长达到70%～80%时进行后续实验。
1.2.2 持续静压力模型的制作 参考以往文献资料制作持续静压力模型。取压力锅1个，去除顶盖中心的排气孔及旁边的安全阀代之以双向进气孔及压力表，用相应的螺母固定并密封使不漏气，保留其余结构，制成加力装置(图1)[5]。压力表可控制压力锅内的大气压力并能精确至0.009 8 kPa。使用前紫外线消毒30 min，将培养瓶放入加压装置内，调整加压值，最后将装置置于37 ℃含体积分数5%CO2的孵箱内。
图 1 持续静压力模型
Fig 1 The controllable pressure device
1.2.3 实验分组 取对数期生长的ACC-2细胞接种于小号细胞培养瓶中，以未加压的ACC-2细胞为阴性对照组，加压的ACC-2细胞根据不同的加压强度和加载时间分为以下几组：加压强度7.551、7.649、7.747 kPa，加载时间3、6、12、24 h。采用CCK-8法检测加压对细胞生长活力的影响，根据测试结果并结合相关的文献筛选出最佳的加压强度及加压时间。
1.2.4 CCK-8法检测细胞增殖 加压组及对照组以每孔1×104个细胞密度接种于96孔板上，每孔加入含血清培养基190 ?L，CCK-8溶液10 ?L，放置2 h以后在490 nm处测量吸光度，连续观察5 d，依次绘制细胞生长曲线。
1.2.5 免疫荧光法检测Ki67表达 密度为5×104个·mL-1的细胞悬液滴于爬片中央 ......
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