shRNA干扰蛋白激酶D—2基因提高Tca8113对化疗药物的敏感性研究(3)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.5 细胞凋亡率及对化疗药物的敏感性的检测
将处于对数期的稳定建株的3组细胞密度分别调整为每毫升2×105个，将其种于6孔板中，24 h后加入10×10-3 mg·L-1PTX、10 mg·L-1CBP，于37 ℃、5%CO2培养箱中培养72 h后，分别用0.25%胰酶消化，小心吹打，离心管收集。4 ℃ 1 000 r·min-1离心5 min，磷酸盐缓冲溶液清洗2次，每次5 min；再次1 000 r·min-1离心5 min，用结合缓冲液制备密度为每毫升2×106个的悬液，每支流式管中200 μL悬液，加入膜联蛋白质-V染料，避光孵育20 min；再加入碘化丙啶(propidium iodide，PI)染料，避光孵育
5 min，用流式细胞仪检测。实验重复3次。
1.6 免疫组化方法检测Tca8113中P-gp的表达
将上述3组细胞以每孔6×104个的密度接种于6孔板中的盖玻片上，用PTX、CBP各自的IC50浓度诱导细胞72 h，弃上清后，用4%的多聚甲醛固定30 min，由高到低不同浓度的乙醇脱水，3%H2O2避光处理
30 min，pH7.4的PBS冲洗盖玻片5 min×3次，于37 ℃敷P-gp抗体2 h，PBS冲洗5 min×3次，最后用DAB显色液显色，终止显色后用苏木精复染，并用显微镜观察、记录染色结果。
1.7 统计学分析
采用SPSS 13.0统计软件对实验结果进行分析，两样本的均数比较用组间t检验 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。